JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:38 dk. • July 8th, 2025
Katyonik lipid bazlı bir transfeksiyon ajanı içeren bir tüp ile başlayın ve rekombinant ekspresyon plazmitleri ekleyin.
Plazmit, bir promotör altında metalopeptidaz hedefli rekombinant antikorları ve yeşil floresan proteini veya GFP'yi kodlayan bir gen taşırken, antibiyotik direnç geni başka bir promotörün altındadır.
Pozitif yüklü lipitler, negatif yüklü bir plazmit ile etkileşime girerek bir kompleks oluşturur.
Kompleksleri, memeli hücreleri içeren çok kuyulu bir plakaya aktarın ve plazmidin sitoplazmaya girmesini sağlayın.
Plazmit çekirdeğe ulaşır ve antibiyotik direnç proteinleri için mRNA'lara ve rekombinant antikorları ve GFP'leri kodlayan bisiktronik mRNA'lara kopyalanır.
Bu mRNA'lar, rekombinant antikorların, GFP'lerin ve antibiyotik direnç proteinlerinin üretimine yol açar.
Transfeksiyon sonrası, ortamı serumla zenginleştirilmiş bir ortamla değiştirin.
Antibiyotiğe dirençli transfekte edilmiş hücreler hayatta kalırken, transfekte edilmemiş hücreleri seçici olarak ortadan kaldıran bir antibiyotik ekleyin.
Floresanla aktive edilen hücre sıralama tekniğini kullanarak, rekombinant antikorları eksprese eden yeşil floresan hücreleri toplayın.
Seyreltilmiş transfekte edilmiş hücr
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin