Antikorlar tarafından Fc Reseptör Aktivasyonunu İncelemek için Bir İn Vitro Yapay Aktivasyon Testi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:32 dk. • July 8th, 2025
Doğal öldürücü veya NK hücrelerinin bir süspansiyonunu alın.
Anti-CD20 monoklonal antikorları ekleyin ve inkübe edin.
CD20 antijenini eksprese eden hedef kanser hücrelerinin yokluğunda, antikorların Fc bölgesi, NK hücre yüzeyindeki FcγRIIIa reseptörlerine bağlanır.
Kuluçka sonrası, soğutulmuş ortam ekleyin. Bağlanmamış antikorları santrifüjleyin ve çıkarın.
Ardından, anti-insan κ hafif zincir antikorları ekleyin. Kuluçkaya yatmak.
Bu ikincil antikorlar, monoklonal antikorların κ hafif zincirine bağlanır.
Antikor çapraz bağlanması, hedef antijen bağlanmasını taklit ederek hücre içi bir sinyal kaskadını tetikler.
Bu, kanser hücrelerinin yokluğunda NK hücrelerinin yapay olarak uyarılmasına neden olur.
Aktive edilmiş NK hücreleri hücre iskeleti yeniden düzenlenmesine uğrar ve sitotoksik granüller salgılar.
Ayrıca, hücreler kemokinler ve sitokinler üretir.
İstenilen sürenin ardından, hücre stimülasyonunu durdurmak için soğutulmuş ortam ekleyin.
Tüpü santrifüjleyin. Antikor aracılı efektör NK hücre fonksiyonlarının aşağı akış analizi için süpernatan ve hücre peletini toplayın.
100 mikrolitre yeniden süspanse edilmiş doğal öldürücü hücreleri 1.5 mililitrelik tüplere veya 96 oyuklu bir U-a
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin