JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 2:53 dk. • July 8th, 2025
Antijene özgü B hücrelerinden klonlanan bir antikor ağır zincirini veya bir antikor hafif zincirini kodlayan ökaryotik ekspresyon vektörlerini ele alalım.
Negatif yüklü vektörlerle elektrostatik olarak etkileşime giren ve polipleksler oluşturan katyonik bir polimer olan polietilenimi tanıtın.
Memeli hücrelerini, hücrelere yapışan ve endositoz yoluyla içselleştirilen poliplekslerle kuluçkaya yatırın. Elde edilen endozomlar lizozomlarla birleşir.
Poliplekslerdeki polimerler, vezikülün ozmotik şişmesine neden olarak yırtılmasına ve vektörlerin salınmasına neden olur.
Serbest bırakılan vektörler çekirdeğe girer ve endoplazmik retikulum üzerindeki ribozomlar yoluyla translasyona uğrayan ağır zincirli ve hafif zincirli mRNA'ya kopyalanır.
Elde edilen peptit zincirleri, Golgi'ye taşınan ve salgı veziküllerine paketlenen antikorlar halinde toplanır.
Salgı veziküllerinin ve hücre zarının füzyonu üzerine, antikorlar hücre dışı olarak salınır.
Aşağı akış tahlilleri için antikor içeren süpernatanı hasat edin.
Transfeksiyondan bir gün önce, düz tabanlı 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğunda% 10 fetal sığır serumu ile desteklenmiş 200 mikrolitre Dulbecco'nun Modifiye Eagle Medium'unda 15.000 in
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin