JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 2:28 dk. • July 8th, 2025
Antikor bağlayıcı bir bakteri proteini olan hareketsizleştirilmiş Protein A içeren gözenekli bir cam reçine içeren bir FPLC sütunu alın. Sütunu nötr bir pH tamponu ile dengeleyin.
Monoklonal antikorlar ve kontamine proteinler ve DNA içeren Çin hamster yumurtalık hücrelerinden hasat edilen hücre kültürü sıvısını ekleyin.
Protein A, antikorun Fc bölgesine bağlanarak onları hareketsiz hale getirir.
Bazı kirleticiler reçineye spesifik olarak yapışmazken, geri kalanı akar.
Kromatogramda, numune yüklemesi sırasında artan UV absorbansı, akışta yüksek bir protein konsantrasyonunu gösterir.
Absorbansta bir azalma ile gösterilen bağlanmamış kirleticileri çıkarmak için dengeleme tamponu ile yıkayın.
Yüksek tuzlu bir tampon ile yıkayın, spesifik olmayan etkileşimleri bozun ve küçük bir kirlilik zirvesi ile gösterilen kirleticileri çıkarın.
Protein A-antikor etkileşimini bozmak için düşük pH'lı bir elüsyon tamponu ekleyin ve karşılık gelen pikin izlenmesiyle toplanan antikorları elüte edin.
Bozunmayı önlemek için toplanan antikorların pH'ını nötralize edin.
Saflaştırma sistemine bağlı yazılımı açarak ve saflaştırılmış antikor elüatını toplamak için 15 mililitrelik konik tüpler ve yüksek tuzlu y
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin