JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:48 dk. • July 8th, 2025
Amin işlevli filtre kağıdı diskleriyle başlayın ve bunları çapraz bağlama reaktifi olan glutaraldehit içine daldırın.
Gluteraldehit, bir amin-aldehit reaksiyonu yoluyla amin grupları ile reaksiyona girer.
Diskleri bir tüpe yerleştirin. Kalan glutaraldehiti çıkarmak için su ekleyin, çalkalayın ve aspire edin.
Kurutma sonrası, immünoglobulin-G-Fc fragmanına özgü yakalama antikorlarını tanıtın. Bu antikorlar üzerindeki amin grupları, kağıt diskler üzerindeki aldehit grupları ile etkileşime girerek kovalent immobilizasyonlarını kolaylaştırır.
Bağlanmamış antikorları çıkarmak için yıkayın ve spesifik olmayan bağlanmayı önlemek için bir bloke edici tampon uygulayın.
Daha sonra, kağıt diske immünoglobulin G molekülleri içeren bir test numunesi ekleyin. İmmünoglobulin G molekülleri, yakalama antikorları ile etkileşime girer.
Yaban turpu peroksidaz konjuge IgG-Fc fragmanına özgü tespit antikorları ile kaplama, önceden bağlanmış immünoglobulin G ile etkileşime girer.
Bağlanmamış antikorları çıkarmak için yıkayın ve bir kromojenik substrat ve hidrojen peroksit karışımı ekleyin.
Hidrojen peroksit varlığında, yaban turpu peroksidaz, kromojenik substratın oksidasyonunu katalize eder ve disk üzer
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin