Enfekte bir hücrede konakçı ve patojen proteinlerini görselleştirmek için çift etiketli bir immünofloresan tekniği

Patojenik bir parazit ile enfekte olmuş sabit ve geçirgen epitel hücreleri ile başlayın.

Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir engelleme tamponu ekleyin.

Özellikle parazitin proteinleri ile etkileşime giren fare poliklonal birincil antikorları ile kaplama.

Parazitik proteine bağlı birincil antikorlarla etkileşime giren uzak kırmızı florofor işaretli ikincil antikorlar ekleyin.

Bağlanmamış antikorları çıkarmak için yıkayın. Konak-protein etiketlemesi sırasında çapraz reaktiviteyi en aza indirerek, birincil antikorlara bağlanan anti-fare antikorları ile bloklayın.

Epitel hücreleri içinde konakçı ribonükleoproteinleri hedef alan fare monoklonal primer antikorları ekleyin.

Sırasıyla konakçı proteine bağlı primer antikorların ve aktinin etiketlenmesini kolaylaştıran, yeşil florofor etiketli ikincil antikorlar ve kırmızı florofor konjuge phalloidin karışımı ile kaplayın.

Bir tampon ile yıkayın. Konakçı çekirdeğe, parazit çekirdeğine ve kinetoplasta mavi bir renk veren DNA lekesi içeren bir ortam kullanarak monte edin.

Numuneleri konfokal bir mikroskop kullanarak analiz edin. Çift etiketli immünofloresan tekniği, yeşil konak proteinlerini ve kırmızı parazitik proteinleri