JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 2:29 dk. • July 8th, 2025
Hücre toplanmasını önlemek için iyonik olmayan bir yüzey aktif madde ile desteklenmiş, serumsuz bir ortamda stabil şekilde transfekte edilmiş memeli hücreleri içeren bir şişe ile başlayın.
Bu hücreler, terapötik antikor üretimi için entegre ağır ve hafif zincirli genler içeren modifiye edilmiş bir genom taşır.
Hücresel metabolizma için gerekli olan, besin açısından zengin bir peptit ve amino asit kaynağı olan triptonu tanıtın.
Hücre bu amino asitleri ve peptitleri kullanır ve çoğalır, bu da daha yüksek bir antikor verimini destekleyen aşırı büyüme ile sonuçlanır.
Hücrelerdeki genlerin ekspresyonu, ağır ve hafif zincirli polipeptitlerin üretimini yönlendirir.
Endoplazmik retikulumda, bu zincirler zincirler arası disülfid bağları yoluyla katlanır ve dimerize olur ve terapötik antikorlar oluşturur.
Golgi aygıtında, antikorlar translasyon sonrası modifikasyonlara uğrar. Daha sonra veziküller halinde paketlenir ve ortama salınır.
Antikor üretimini artırmak için hücreleri daha uzun süre kuluçkaya yatırın.
Hücre canlılığı azalmaya başladığında, süpernatanı hasat edin.
Terapötik antikorlar içeren süpernatanı filtreleyin ve daha sonra kullanmak üzere daha düşük bir sıcaklıkta saklayın.
İki şişede 100 mililitre serumsuz ortamda mililitrede 2 x10 5 hücrede tohum hücreleri. Hücreleri 37 santigrat derecede ve 5 saat boyunca dakikada 120 dönüşte% 24 karbondioksitte inkübe edin. Besin takviyesi yapılan kültüre, %0.5'lik bir nihai konsantrasyona kadar tripton ekleyin. Ardından, takviye edilmemiş kültürün hacmini eşitlemek için serumsuz ortam kullanın. Hücreleri yedi gün daha inkübe edin.
Kültürlemenin sekizinci gününden itibaren, hücre canlılığını izlemek için bir hemositometre kullanarak hücreleri günlük olarak sayın. Hücre canlılığı% 80'in altına ulaştığında, kültürü 15 dakika boyunca 3.000 kez g'de santrifüjleme ile hasat edin. Ardından, süpernatanı 0.22 mikrometrelik bir filtreden filtreyle sterilize edin. Süpernatanları kısa vadede 4 santigrat derecede saklayın veya uzun vadede santigrat derecede dondurun.