JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:03 dk. • July 8th, 2025
Antikor bağlayıcı bir protein olan Protein A'ya konjuge edilmiş agaroz boncukları içeren bir afinite kromatografi sütunu alın.
Sütunu dengelemek için nötr pH'lı bir bağlayıcı tampon ekleyin.
Kültür süpernatanı, monoklonal antikorlar ve kontamine hücresel proteinler içeren antikor üreten bir hücre kültüründen yükleyin.
Nötr pH, kirleticiler akarken protein A'nın antikorların Fc bölgesine bağlanmasını kolaylaştırır.
Bir kromatogram oluşturmak için akışın UV emilimini ölçün. Numune yükleme sırasındaki yüksek absorbans, akıştaki bağlanmamış proteinleri gösterir.
Özel olarak bağlı olmayan kirleticileri çıkarmak için sütunu bağlayıcı tamponla yıkayın.
Protein A-antikor etkileşimini bozmak için düşük pH'lı bir elüsyon tamponu ekleyin. Absorbanstaki zirveyi izleyerek ayrıştırılan antikorları toplayın.
Antikor bozulmasını önlemek için pH'ı nötralize edin ve bir santrifüj filtreye aktarın.
Antikorları konsantre etmek için santrifüjleyin ve aşağı akış tahlilleri için bir tamponda yeniden süspanse edin.
Arabellekleri hazırladıktan ve FPLC sistemini metin protokolüne göre başlattıktan sonra, çalıştırma adımlarını aşağıdaki gibi ayarlamak için yöntem düzenleyicisini kullanın. Sistemi beş sütun h
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin