Organ Alıcılarında Anti-donör HLA Alloantikorlarının Peptit Dizisi Tabanlı Tespiti
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:15 dk. • July 8th, 2025
Bir organ bağışçısının insan lökosit antijeninden veya selüloz membran üzerinde farklı peptitler içeren HLA dizisinden türetilen bir peptit dizisi alın.
Her peptit, verici ve alıcı HLA dizisi arasında en az bir amino asit uyumsuzluğu taşır ve bu da antikor aracılı organ reddi için potansiyel bir epitopu temsil eder.
Spesifik olmayan antikor etkileşimini önlemek için bir bloke edici tampon ile tedavi edin.
Alloantikorlar içeren organ nakli sonrası toplanan alıcı serumu ekleyin.
Donörün HLA'sına karşı oluşan bu antikorlar, hedef epitoplarına bağlanır.
Alloantikora bağlanan peroksidaz konjuge bir ikincil antikor ekleyin.
Kemilüminesan substrat ve hidrojen peroksit ekleyin. Peroksidaz, substratı oksitlemek ve ışık yaymak için hidrojen peroksit kullanır.
Bir görüntü elde etmek için zarı tarayın.
Bağlı antikorları sıyırmak için bir tampon ekleyin. Transplantasyon öncesi alıcı serumu ile yeniden problayın ve bir görüntü elde edin.
Transplantasyon öncesi görüntü ile karşılaştırıldığında, transplantasyon sonrası görüntüdeki koyu lekeler, alloantikor reaktivitesini indükleyen donöre özgü HLA epitoplarını gösterir.
Diziler sentezlendiğinde, zarları sallama ile uygun inkübasyon süresi için% 0.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin