JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:57 dk. • July 8th, 2025
Bir mikroskop aşaması üzerinde agaroz içine gömülü dekoryonlu zebra balığı embriyoları içeren bir kültür kabı yerleştirin.
Kırmızı floresan etiketli bir antikor ve bir anti-DeltaD antikoru taşıyan, düşük konsantrasyonda antikor konjugatları içeren bir boya çözeltisi alın.
Boya solüsyonunu embriyonun arka beyin ventrikülüne enjekte edin ve aktif olarak bölünen radyal glia progenitörlerini veya RGP'leri hedefleyin.
Gömülü embriyoyu serbest bırakın ve besin açısından zengin bir ortamda kurtarın.
İyileşme sırasında, floresan konjugatlar, RGP üzerindeki birkaç Notch ligand DeltaD molekülü ile etkileşime girerek içselleştirmeyi ve endozom oluşumunu başlatır.
Düşük eşlenik konsantrasyon, bağlanmamış DeltaD ligandlarının Notch reseptörü ile etkileşime girmesine izin vererek RGP'lerde Notch sinyal yolunu aktive eder.
İyileştikten sonra, agarozlu anestezi uygulanmış bir embriyoyu, görüntüleme için sırt tarafı aşağı bakacak şekilde bir cam kaba aktarın.
DeltaD içeren floresan endozomların iki yavru hücreye asimetrik bir şekilde bölünmesini gösteren ve Notch/DeltaD sinyalinin aktivasyonunu doğrulayan hücre bölünmesini yakalamak için hızlandırılmış floresan görüntüleme gerçekleştirin.
Gömülü em
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin