JoVE Encyclopedia of Experiments
İmmünoloji
0 görüntüleme • 3:31 dk • July 8th, 2025
Spesifik antikorlarla basılmış bir antikor mikrodizi çipi ile başlayın.
Her nokta, belirli bir siyanobakteri suşuna karşı benzersiz bir antikor içerir.
Spesifik olmayan etkileşimleri en aza indirmek için çipe bir engelleme tamponu uygulayın.
Çipi, birden fazla kuyucuğa sahip bir hibridizasyon kasetine monte edin.
Kuyucuklara çevresel bir numune verin ve optimize edilmiş koşullar altında inkübe edin.
Numune, basılı çip üzerindeki spesifik antikorlarla etkileşime giren farklı siyanobakteri suşları da dahil olmak üzere çeşitli bakteriler içerir. Bağlanmamış bakterileri çıkarmak için çipi yıkayın.
İlgili siyanobakteriyel hücreler üzerinde spesifik antijenlerle etkileşime giren florofor etiketli anti-siyanobakteriyel-suş antikorları içeren bir antikor karışımı ekleyin. Bağlanmamış antikorları çıkarın.
Kaseti sökün, çipi yıkayın ve kurutun, ardından tarayın.
Belirli noktalardaki floresan, numunedeki belirli siyanobakteri suşlarının varlığını gösterir.
Sağlayıcının talimatlarını izleyerek slaydı 3'e 8 kuyulu bir mikrodizi hibridizasyon kasetine yerleştirin. Alternatif olarak, antikor baskı modelini değiştirdikten sonra, burada gösterildiği gibi özel yapım bir kaset ayarlayın veya kurulum için sadece kapak slaytlarını kullanın.
Slayt ve kaset montajını takiben, her bir numune ekstraktından 50 mikrolitreye kadar pipetleyin veya ekstraksiyon inkübasyon tamponunda kasetin her bir oyuğuna seyreltin. Alternatif olarak, numuneleri diğer inkübasyon cihazlarına yükleyin veya sadece kapak slaytları kullanın.
Boş bir kontrol olarak, 50 mikrolitre TBST-RR tamponunu kasetin en az iki ayrı kuyusuna pipetleyin. Numuneleri ortam sıcaklığında 1 saat inkübe edin ve her 15 dakikada bir pipetleyerek karıştırın veya 4 santigrat derecede 12 saat inkübe edin.
Mikrodizileri yıkamak için kaseti yere yerleştirin ve temiz emici kağıda dikkatlice vurun. Daha sonra, her birine 150 mikrolitre ekstraksiyon inkübasyon tamponu ekleyerek kuyuları yıkayın ve daha önce olduğu gibi emici kağıda vurarak tamponu çıkarın. Yıkamayı üç kez daha tekrarlayın.
Her oyuğa, 17 anti-siyanobakteriyel suş antikoru içeren 50 mikrolitre floresan antikor karışımı ekleyin. Numuneleri ortam sıcaklığında 1 saat veya 4 santigrat derecede 12 saat inkübe edin.
Mikrodizileri yıkamak için kaseti dikkatlice yere yerleştirin ve temiz emici kağıda hafifçe vurun. Ardından, bir kağıt havluya hafifçe vurarak çıkarmadan önce 150 mikrolitre ekstraksiyon inkübasyon tamponu ekleyin. Yıkamayı üç kez tekrarlayın. Ardından, kaseti sökün ve hızlı bir durulama için sürgüyü 0.1x PBS solüsyonuna daldırın. Slaytı kurutmak için daha önce olduğu gibi hızlı bir şekilde santrifüjleyin.
Bir floresan tarayıcı kullanarak, uzak kırmızı floresan boya için maksimum emisyon zirvesinde floresan için slaydı tarayın. Kazanç değerini değiştirerek farklı tarama parametrelerinde mikrodizilerin birkaç görüntüsünü alın.
Bu çalışma, antikor mikroarray çipi kullanarak spesifik siyanobakteri suşlarının tespit edilmesi için bir yöntem sunmaktadır. İşlem, çeşitli siyanobakteri etkileşimlerini tanımlamak ve miktarını belirlemek amacıyla çevresel örneklerin antikorlarla işlenmesini içermektedir.
Antikor mikro-dizi çipleri, karmaşık çevresel örneklerdeki siyanobakteri suşlarının çoklu tespitini sağlayarak yüksek kapasiteli biyolojik karakterizasyonu destekler. Bu yetenek, hedef doğrulama ve mekanistik risk azaltma için kritik olan kantitatif, suşa özgü veriler sağlayarak erken keşif iş akışlarını geliştirir. Bu yaklaşım, mikrobiyal profilleme ve analiz geliştirme için sağlam, ölçeklenebilir araçlar arayan biyofarma ekipleri için uygundur.
Bu antikor mikroarray tekniği, keşiften preklinik aşamaya kadar olan sürece uyum sağlayarak erken mikrobiyal profilleme yapılabilmesine olanak tanır ve öncü bileşik tanımlama kararlarını destekler.
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
Son güncelleme: 29 Ağustos 2026