JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:39 dk. • July 8th, 2025
Doğal hücre dışı matris ortamını taklit eden bir hidrojel sisteminde kapsüllenmiş memeli hücreleri içeren çok kuyulu bir plaka alın.
Kültür ortamını çıkarın. Hücresel bütünlüğü koruyarak proteinleri çapraz bağlamak için bir fiksasyon tamponu ile muamele edin.
Hücresel zarı geçirgen hale getirmek için deterjan içeren bir çözelti ekleyin.
Sonraki adımlarda spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir bloke edici çözelti tanıtın.
Hücrelere giren ve spesifik olarak sitoplazmik ara filamentlere ve hedef transkripsiyon faktörüne bağlanan bir birincil antikor kokteyli ekleyin.
Bağlanmamış antikorları çıkarın. DNA'yı floresan olarak etiketlemek için floresan etiketli ikincil antikorlar ve bir nükleer leke ekleyin.
Bağlanmamış molekülleri çıkarın.
Hidrojel kültürünü bir montaj ortamı kullanarak bir kızak üzerine monte edin.
İmmün lekeli hücreleri gözlemlemek için konfokal bir mikroskop kullanın.
İlk olarak, ortamı her bir kuyucuktan aspire edin. Ardından, kuyuları 1 mililitre ılık DPBS ile yıkayın. Yıkama tamamlandıktan sonra, her kuyucuğa 750 mikrolitre sabitleme çözeltisi ekleyin. Ardından, 24 oyuklu plakayı 37 santigrat derecede 30 dakika inkübe edin. İnkübasyondan sonra, sabit
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin