Virüs Kaynaklı Peptit Modifiye Antikor Konjugatlarının Hücre İçi Dağılımının Değerlendirilmesi

Yapışmış insan eritroblast hücreleri ile başlayın.

Virüs türevi, peptit ile modifiye edilmiş antikor konjugatlarını tanıtın. Bu konjugatlar, virüsten bir nükleer lokalizasyon dizisi veya NLS ve bir kolik asit kalıntısı içerir.

İnkübasyon sırasında, antikor konjugatları hücre yüzeyi reseptörleri ile etkileşime girer ve endozomlar içinde içselleştirilir.

Konjugattaki kolik asit, endozomal bölmeden kaçmaya yardımcı olarak hücre içi birikimi sağlarken, taşıma proteinleri ve NLS nükleer lokalizasyonlarını kolaylaştırır.

Hücreleri ayırmak ve yüzeye bağlı konjugatları çıkarmak için tripsin ve EDTA içeren tamponu ekleyin.

Tripsin aktivitesini inhibe etmek için serumla zenginleştirilmiş ortam ekleyin.

Hücreleri toplamak için santrifüjleyin; onları sabitleyin ve geçirgenleştirin.

Lokalize konjugatlara bağlanan uzak kırmızı florofor işaretli ikincil antikorları tanıtın ve yıkayın.

Nükleer boyama boyası ile tedavi edin.

Konfokal mikroskop altında gözlemleyin ve çeşitli düzlemsel derinliklerde görüntüler yakalayın.

Görüntü işlemeden sonra hücre, sitoplazma ve çekirdek içinde küçük yeşil floresan odaklar gösterir ve antikor konjugatlarının hücre içi dağılımını doğrular.

Hedef TF-1a hücrelerini 2