Kapasitif İmmünoprob Biyosensörü Kullanarak Hedef Peptit Tespiti ve Ölçümü

Bir polidopamin tabakasına sahip monte edilmiş perfloroalkoksi kaplı bir platin tel ile başlayın.

Bu probu, polidopamin üzerinde hareketsiz hale gelen ve bir immün prob oluşturan hedef peptit spesifik antikorlar içeren bir çözeltiye batırın.

İmmünoprobu yıkayın ve bir devre kurarak gümüş klorür toprak elektrotlu bir akış odasına yerleştirin.

İlk olarak, tamponu tanıtın ve immünoprobu etkinleştirmek için bir voltaj uygulayın, bu da bir pil veya kapasitör olarak işlev görmesini sağlayarak enerjiyi bir elektrik yükü olarak depolar.

Referans değer çizgisini oluşturmak için elektrik sinyalini kaydedin.

Şimdi, biyosensörü hedef peptitleri içeren bir çözeltiye maruz bırakın.

Bu peptitler, prob üzerindeki antikorlara bağlanarak yerel yükte ve biyosensörde depolanan enerjide bir değişikliğe neden olur.

Elektrik sinyalini kaydedin. Sinyaldeki bir artış, hedef peptitin varlığını gösterirken, bu sinyalin büyüklüğü hedef peptit konsantrasyonu ile ilişkilidir.

İlk olarak, 25 santimetre uzunluğunda perfloroalkoksi kaplı platin tel kesin. Daha sonra, bir neşter kullanarak, platin teli kesmemeye dikkat ederek bir ucundan yaklaşık 5 milimetre perfloroalkoksi kaplamayı soyun. Şimdi, platin telin soyulmuş ucunu altın kaplama, 1 milimetre erkek konektör pimine yerleştirin. Ardından, pense kullanarak, konektör pimi dişlerini platin telin soyulmuş ucunun etrafına kıvırın ve platin teli altın kaplama konektör pimine lehimleyin.

Daha sonra, pH 6 ile 50 mililitre 10 milimolar PBS'ye 50 miligram dopamin hidroklorür ekleyerek dopamin çözeltisini hazırlayın ve karıştırarak karıştırın. Dopamini tamamen çözdükten sonra, platin telin ucunu taze yapılmış dopamin takviyeli PBS'yi içeren kaba yerleştirin. Gümüş klorür disk elektrodunu kafa aşamasındaki toprak kanalına bağlayın. Ardından, gümüş klorür diskini dopamin takviyeli PBS ve platin tel içeren kaba yerleştirin.

Daha fazla ilerlemeden önce, kafa aşamasının referans kanallarına bir tel şönt bağlayın. Etkileşimli veri toplama yazılımını açın ve başlangıç potansiyelini eksi 0,6 volt, bitiş potansiyelini 0,65 volt, tarama hızını saniyede 0,04 volt ve biriktirme süresini 420 saniye olarak ayarlayarak bir testere dişi elektrodepozisyon komut potansiyeli protokolü ayarlayın.

Polidopamin birikimini tamamladıktan sonra, gümüş klorür öğütülmüş peletini ve platin telin ucunu kaptan çıkarın. Tel ucunu 2 ila 5 dakika boyunca pH 7.4 PBS içeren bir mikrotüpe yerleştirin ve tel ucunun mikrotüpün yanlarına veya altına temas etmediğinden emin olun. Daha sonra, ilgilenilen antikoru pH 7.4 PBS ile 1 ila 20 oranında, uygun büyüklükte bir kapta birleştirerek antikor çözeltisini hazırlayın.

Daha sonra, platin elektrotun polidopamin biriken ucunu oda sıcaklığında iki saat boyunca antikor çözeltisine batırın, platin tel ucunun çözelti içinde asılı kaldığından ve mikrotüpün iç yüzeyine dayanmadığından emin olun. Kapasitif immünoprobun fonksiyonel ucunu akış odasına yerleştirin, elektrotun ucunu herhangi bir şekilde rahatsız etmemeye dikkat edin, çünkü bu probun duyusal ucuna zarar verebilir.

İlk deneysel testten önce, kapasitif immünoprobu koşullandırmak için bir TBS standart çalışması gerçekleştirin ve voltaj protokolü için pozitif adım potansiyelini 110 milivolta, negatif adım potansiyelini eksi 5 miliruba, adım süresini 20 milisaniyeye ve edinme süresini 600 saniyeye ayarlayın.

Daha sonra, aynı TBS'yi kullanarak ilgilenilen peptit çözeltisini oluşturun. Süperfüzyonun bileşimini korumak için, süperfüzyonun TBS ve peptit takviyeli TBS arasında değiştirilebileceği bir manifold sistemi kurun. TBS standart parametrelerini kullanın ve edinme süresini 360 saniyeye ayarlayarak peptit algılama veri toplama protokolünü ayarlayın.