Hipokampal Nöronlarda Glutamat Reseptör Kaçakçılığını İncelemek İçin İn Vitro Bir Teknik
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 5:27 dk. • July 8th, 2025
Lameller üzerinde üç hipokampal nöronal kültür örneği alın.
Yüzeyde eksprese edilen glutamat reseptörlerini etiketlemek için birincil antikorları tanıtın.
Antikora bağlı reseptörlerin endositozunu indüklemek için ikinci ve üçüncü numunelere şartlandırılmış bir ortam ekleyin.
Üçüncü örnekte, endositozlu olmayan antikorlar üzerindeki epitopları bloke etmek için Fab fragmanları ekleyin.
Reseptörün yüzeye geri dönüşümüne izin verirken reseptör endositozunu bloke etmek için bir inhibitör ekleyin.
Tüm örneklerde, hücreleri sabitleyin ve spesifik olmayan etiketlemeyi önlemek için bir engelleme solüsyonu ekleyin.
Geri dönüştürülmüş olanlar da dahil olmak üzere yüzeye bağlı reseptörler üzerindeki birincil antikorları etiketlemek için florofor etiketli ikincil antikorları tanıtın.
Hücresel zarları geçirgenleştirir.
Önceden var olan endositozlu reseptörleri etiketlemek için birincil antikoru ilk numuneye tekrar ekleyin.
Endositozlu ve yüzeye bağlı reseptörler arasında ayrım yaparak, endositozlu reseptöre bağlı birincil antikorları etiketlemek için tüm numunelere farklı bir florofor etiketli ikincil antikor ekleyin.
Konfokal bir mikroskop kullanarak, farklı tedavilerde yüzey eksprese edilen, e
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin