Fagositler tarafından Antikora Bağımlı Hücresel Fagositozu Ölçmek için İn Vitro Test

İlgilenilen bir antijene konjuge edilmiş floresan etiketli mikroküreleri alın. İmmobilize antijenler, antijene özgü antikorlara bağlanır.

Fagositik olmayan lenfositler, fagositik granülositler ve monositler dahil olmak üzere lökositler ekleyin. Karışımı fizyolojik koşullar altında inkübe edin.

İmmobilize antikorun Fc bölgesi, fagosit üzerindeki Fc reseptörüne bağlanarak antikora bağımlı hücresel fagositozu veya ADCP'yi tetikler.

Hücreleri peletlemek için santrifüjleyin ve içselleştirilmemiş mikro küreler içeren süpernatanı atın.

Ölü hücrelere giren ve onları floresan olarak etiketleyen bir canlılık lekesi ekleyin.

Hücreleri peletlemek ve süpernatanı çıkarmak için santrifüjleyin.

Lökositlere bağlanan floresan etiketli antikorlar ekleyin.

Süpernatanı atmak ve hücreleri sabitlemek için santrifüjleyin.

Akış sitometrisini kullanarak, önce canlılık lekesi için pozitif olan ölü hücreleri ortadan kaldırın.

Ardından, canlı lökositleri seçin ve granülositler, monositler ve lenfositler arasında taneciklik ve saçılma özelliklerine göre ayrım yapın.

ADCP aktivitelerini ölçmek için mikroküre pozitif fagositik hücrelerin floresan yoğunluğunu ölçün.

Bir ADCP tahlili için, son santrifüjlemeden sonr