JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:24 dk. • July 8th, 2025
İnsan bağırsak bakterilerinin bir süspansiyonunu içeren bir tüp alın.
İnsan norovirüs virüsü benzeri parçacıklar veya VLP'ler ekleyin. VLP'ler sağlam bir viral kapsid içerir, ancak genomik RNA'dan yoksundur, bu da onları insanlar için bulaşıcı olmayan hale getirir.
İnkübasyon sırasında, VLP kapsid proteinleri, bakteri yüzeyinde eksprese edilen spesifik karbonhidratlara bağlanarak VLP-bakteri kompleksleri oluşturur.
Kompleksleri peletlemek için santrifüjleyin ve bağlanmamış VLP'leri atın.
Spesifik olmayan antikor bağlanma bölgelerini bloke etmek için protein içeren bir bloke edici çözelti uygulayın ve sonraki adımlarda arka plan lekelenmesini azaltın.
Floresan etiketli VLP'ye özgü antikorlar ekleyin ve inkübe edin.
Antikorlar, VLP kapsid üzerindeki hedef bölgelerine bağlanarak VLP-bakteri komplekslerini etiketler.
Kompleksleri peletlemek için santrifüjleyin. Bağlanmamış antikorları atın ve peleti bir akış sitometrisi tamponunda yeniden süspanse edin.
Bir akış sitometresi kullanarak, VLP-bakteri kompleksleri tarafından yayılan floresan sinyallerini tespit edin ve numunedeki bağlı bakteri yüzdesinin ölçülmesine izin verin.
Reaktifleri, antikorları ve bakterileri el yazmasında anlatıld
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin