JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 5:01 dk. • July 8th, 2025
Tümör mikroçevresinde sızan CD8 + T hücreleri sergileyen bir renal hücreli karsinom dokusu kriyoseksiyonu alın.
Dokuyu sabitlemek ve geçirgen hale getirmek için aseton ile tedavi edin. Fazla asetonu çıkarmak için yıkayın.
Endojen doku biotinini doyurmak için avidin ekleyin. Daha sonra, hareketsiz avidin bağlanma bölgelerini bloke etmek ve spesifik olmayan etkileşimleri en aza indirmek için biyotin ekleyin.
Bağışıklık hücresi Fc reseptörlerini bloke etmek için immünoglobulinler içeren serum uygulayın ve spesifik olmayan antikor bağlanmasını önleyin.
Sitotoksik bir T hücresi belirteci olan CD8'i ve immünoterapiye dirençli CD8 + T hücresi alt popülasyonları tarafından eksprese edilen inhibitör reseptörler olan PD-1 ve Tim-3'ü hedefleyen bir birincil antikor kokteyli ekleyin.
Anti-CD8 ve anti-Tim-3 antikorlarını hedefleyen farklı florofor işaretli ikincil antikorları tanıtın.
Anti-PD-1 antikorlarını hedefleyen biyotinile edilmiş ikincil antikorlar ve biotin'e farklı bir florofor işaretli streptavidin bağlanması ekleyin.
Hücre çekirdeklerini boyamak için boya içeren bir montaj ortamı uygulayın ve bir lamel yerleştirin.
Tümöre sızan CD8 + T hücrelerini ve PD-1, Tim-3 veya her ikisini bir
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin