Murin Akciğerlerinde Bulunan Doğuştan Gelen ve Adaptif Bağışıklık Hücrelerini Tanımlamak için İn Vitro Bir Yöntem

Kıyılmış murin akciğer dokusunu bir sindirim tamponunda alın ve fizyolojik bir sıcaklıkta inkübe edin.

Tampon enzimler doku matrisini parçalayarak hücreleri gevşetir.

Hücresel kütleyi ayırmak için tritüre edin ve tek hücreleri izole etmek için bir süzgeç kullanarak süspansiyonu süzün.

Süpernatanı doku kalıntıları ile çıkarmak için santrifüjleyin. Kırmızı kan hücrelerini parçalamak için hücreleri bir lizis tamponu ile inkübe edin.

Hücresel kalıntı içeren süpernatanı atmak için santrifüjleyin. Hücreleri yeniden askıya alın ve bir mikroplakaya aktarın.

Fc reseptörlerini bloke etmek için antikorlar ekleyin, arka plan lekelenmesini önleyin.

Doğuştan gelen bağışıklık hücreleri - monositler, makrofajlar, dendritik hücreler, doğal öldürücü hücreler, nötrofiller, eozinofiller ve adaptif bağışıklık hücreleri - B ve T lenfositleri üzerindeki spesifik yüzey belirteçlerini hedefleyen florofor etiketli bir antikor kokteyli tanıtın.

Hücreleri sabitleyin ve geçirgenleştirin. Monositler, makrofajlar, dendritik hücreler ve eozinofiller üzerinde hücre içi bir belirteç için spesifik florofor etiketli antikorlar ekleyin.

Akış sitometrisini kullanarak, etiketli bağışıklık hücrelerini sınıflandırın.

Akci