JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:50 dk. • January 15th, 2026
Nötrofil içeren bir tüp ile başlayın. Protein bozulmasını önlemek için bir proteinaz inhibitörü içeren bir tampon ekleyin.
Nötrofil zarını geçirgen hale getirmek için uygun bir deterjan ekleyin
Bir buz banyosunda, hücre zarını bozmak ve çeşitli proteinler de dahil olmak üzere hücre içi içerikleri serbest bırakmak için numuneyi yüksek frekanslı ses dalgalarıyla sonikleştirin.
Tüp duvarlarından içerik toplamak için kısaca santrifüjleyin ve bunları uygun bir tüpe aktarın.
Bir indirgeyici ajan ekleyin ve disülfid bağ bölünmesini teşvik etmek için yüksek bir sıcaklıkta inkübe edin, bu da proteinlerin denatüre olmasına neden olur.
Soğutun ve sülfhidril gruplarını alkilleyen bir alkilleyici reaktif ekleyin.
Protein çökelmesini indüklemek için soğuk aseton ekleyin.
Proteinleri ve hücre parçalarını peletlemek için santrifüjleyin. Süpernatanı çıkarın ve havayla kurutun.
Protein peletini yeniden çözündürmek için denatüre edici ajan içeren bir tampon ve sonikat ekleyin.
Son olarak, proteinleri parçalayan bir proteaz karışımı ekleyin. Numuneyi daha sonraki işlemler için saklayın.
Başlamak için, nötrofil ile farklılaşmış HL60 hücrelerini, numuneleri 5 dakika boyunca 400 kez g'de santrifüjleyerek
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin