Peptitlerin tuzdan arındırılması ve saflaştırılması için bir STAGE İpucu prosedürü

Minyatür bir saflaştırma sütunu olan STop And Go Extraction veya STAGE İpucu alın.

Uç, hidrofobik etkileşime dayalı peptit saflaştırması için uzun hidrokarbon zincirlerine bağlanmış küçük silika boncuklar içerir.

Reçine safsızlıklarını gidererek yüksek oranda asetonitril içeren tamponlarla yıkayın.

Optimum peptit bağlanması için kolonu dengeleyen bir bağlayıcı tampon ve santrifüj yerleştirin.

Peptit parçaları ve tuzlar dahil safsızlıklar içeren farklılaşmış nötrofil benzeri hücrelerden elde edilen önceden sindirilmiş bir peptit numunesi yükleyin.

Numuneyi kolondan geçirmek için santrifüjleyin. Peptit fragmanları, hidrofobik etkileşimler yoluyla hidrokarbon zincirlerine bağlanırken, tuzlar uzaklaştırılır.

Kalan safsızlıkları gidererek bağlayıcı tamponu ve santrifüjü ekleyin.

Elüsyon için yüksek asetonitril içeren tamponu tanıtın.

Bir şırınga kullanarak, tamponu kolondan geçirin. Asetonitril, hidrokarbon zincirlerine bağlanarak tampon ile elüte olan peptit parçalarının yerini alır.

Saflaştırılmış peptitleri tanımlamak için proteomik profil oluşturma yapın.

Başlamak için, her peptit numunesi için bir STop And Go Ekstraksiyonu veya STAGE ucu oluşturmak için 200 mikrolitrelik bir pipet