Fare İndüklenmiş Mekanik allodini ayrılan sinir hasarı (SNI) Model

Bu prosedürün genel amacı, periferik sinir hasarını takiben nöropatik ağrının bir fare modelini oluşturmaktır. Bu, önce farenin uyuşturulması, arka bacağın uygun pozisyona yerleştirilmesi ve siyatik sinirin açığa çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. Daha sonra, siyatik sinirin iki dalının dikilmesiyle tanımlanmış bir sinir yaralanması ortaya çıkar ve üçüncü dal sağlam bırakılır.

Bu videoda tibial ve ana perineal sinirler dikilerek kesilirken sorel siniri korunmuştur. Ancak sinir yaralanması sonrası başka kombinasyonlar da uygulanabilir. Misa, bir tel örgü masa üzerindeki bir silindir kabın içine yerleştirildi ve Misa'nın alışmasına izin verildi, daha sonra indüklenmiş mekanik allodinin kantitatif bir ölçümüne izin veren Von Fray testi kullanılarak test edildi.

Kalibre edilmiş Von Fray filamentleri, ameliyat edilen gözeneğin yan alanına artan sırada uygulanır. Ameliyat edilen ve derecelendirilmemiş arka bacaktaki mekanik eşiği tespit etmek için, ağrılı bir yanıt, filament stimülasyonu üzerine hızlı gözenek çekilmesi, irkilme ve/veya gözenek yalama olarak tanımlanır. Sonuç olarak, ameliyat edilen bacakta derecelendirilmemiş tarafa kıyasla mekanik allodini gelişimi, zaman içinde mekanik eşiğin çizilmesiyle görselleştirilebilir, bu da periferik sinir yaralanmasını takiben çeşitli moleküler yolakların araştırılmasına veya ilaç tedavilerine olanak tanır.

Bu yöntem, nöropatik ağrı gelişiminde rol oynayan moleküler yollar gibi periferik sinir yaralanması alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Ek olarak, ağrı gelişimini bozmayı veya ağrı semptomlarını hafifletmeyi amaçlayan ilaçlar da test edilebilir Ameliyattan iki gün önce, fareleri sessiz bir odada tel örgü bir masaya yerleştirilmiş kırmızı renkli plastik silindirlere yerleştirin, 15 dakika sonra testten önce fareleri silindirlerde 15 dakika alışkanlık haline getirin, farelerin sakin olduğunu doğrulayın ve ardından von fray filamentlerini artan sırayla uygulayın, 0.02 gram filament ile başlayarak. Önce sol gözeneğin yan bölgesine toplam 30 saniyelik bir süre boyunca beş kez kuvvet uygulayın ve her uygulamadan sonra farenin tepkisini ölçün, aynı filament ve diğer farenin sol gözeneği ile tekrarlayın ve ardından bir sonraki filamente geçmeden önce sağ gözenekle tekrar başlayın.

Pozitif bir ağrı reaksiyonu, filamentin neden olduğu ani gözenek çekilmesi, ayak parmağının yayılması ve/veya aşırı gözenek yalaması olarak tanımlanır ve beş tekrarlayan uyaranın üçünde pozitif yanıt ağrı eşiği olarak tanımlanır. Ketamin ve ksilazin karışımının intraperitoneal enjeksiyonu ile hayvanları uyuşturun ve tamamen anestezi uygulanana kadar hayvanları sessiz bir yere koyun. Kuyruğun ucunu sıkıştırarak ve bir cımbızla duraklayarak refleksleri kontrol edin ve devam etmeden önce hayvanların tepkisiz olduğundan emin olun.

Daha sonra, dehidrasyonu önlemek ve elektrikli bir tıraş makinesi kullanarak enfeksiyonu önlemek için deri altına 0,5 mililitre izotonik salin antibiyotik enjekte edin, ameliyat alanını diz bölgesinin biraz altından kalça bölgesine kadar sağ elini kullanmak için tıraş edin. Sol arka bacak ile çalışan kişiler en uygun olabilir. Pamuklu bir duvar tomurcuğu ile gözlere merhem sürün.

Hayvanı sağ tarafına yerleştirin ve sol arka uzvunu yüksekte tutmak için küçük bir platform üzerine yerleştirin ve bacağını yapışkan bantla sabitleyin. Hayvan yerleştirildikten sonra, ameliyat alanını cerrahi bölgeden alternatif etanol ve Betadine fırçaları ile dezenfekte edin ve kurumasını bekleyin, sol elinizin baş parmağıyla dizini bulun ve uzunlamasına yönde küçük bir kesi yapmak için bir neşter kullanın. Bir makasın ucunu kullanarak cildi künt diseksiyonla açın.

Ardından, fareyi stereo mikroskobun altına yerleştirin ve uyluk kemiğine yakın, açıkça görülebilen kan damarını bulun. Daha sonra künt diseksiyon ile kas tabakasını ayırın. Doğru yapılırsa, kas katmanları, kasların hemen altındaki siyatik siniri ortaya çıkaran herhangi bir kanama olmadan kolayca ayrılacaktır.

Yakındaki bir kan damarının hasar görmesi nedeniyle kanama meydana gelirse, kanama durana kadar bastırarak kanı emmek için pamuklu duvar tomurcukları veya gazlı bez parçaları kullanın. Ayrılan kas katmanlarını iki numaralı cımbızla dikkatlice yayın. Siyatik siniri görselleştirmek için gerekirse ekartörler uygulayın, sural sinirin siyatik sinirden dallandığı alanı belirleyin.

Sural sinir, sol bacakta sağa doğru dallanan üç dalın en küçüğüdür. C 57'de siyah altı fare, hala paralel olarak çalışan diğer iki dalın etrafına sıkıca altı sıfır dikiş uygular. Sorel dalına dokunmamaya çok dikkat etmek.

Dikişin altından kesilecek sinirleri bir çift beş numara cımbızla tutun ve ardından sinirlerin çekilmesini önlemek için küçük bir makasla sinirleri önce cımbızın üstünden sonra altından kesin. Sinirler kesildikten sonra, dikiş uçlarını bir makasla kesin ve ardından kas tabakasını nazikçe kapatın. Dikiş halkası normalde gerekli değildir.

Yaraya bir damla lidokain ekleyin ve cerrahi düğümlerle dikin. Göz merheminin hala yeterli olup olmadığını kontrol edin ve ardından fareyi temiz bir kafese ve bir kağıt havluya koyun. Rahat bir duruşta, kolay erişilebilir su ve yemek sağlayın.

Oda soğuksa. Ameliyat sonrası iyileşmeden bir gün sonra kafesin bir kısmının altına bir ısı yastığı yerleştirin, temel ölçümleri toplamak için tarif edildiği gibi hem ameliyat edilen hem de sahte ameliyatlı farelerden von fray ölçümlerini toplayın Burada dört ila altı fareden oluşan gruplar üzerinde yapılan Von Fre testinin sonuçları hem ameliyattan bir gün önce hem de ameliyattan sonraki iki hafta boyunca günlük olarak gösterilir. Ameliyattan sonraki gün, hayvanlar ameliyat edilen veya ipsilateral gözenek üzerinde önemli mekanik aşırı duyarlılık geliştirirken, ameliyat edilmemiş veya kontralateral gözenek etkilenmeden kalır.

Kontralateral taraftaki eşik, sahte olarak çalıştırılan farelere kıyasla biraz azalmıştır, bu da ameliyat edilen farelerde MI allodininin küçük bir dereceye kadar ortaya çıkabileceğini gösterir. Bu videoyu izledikten sonra, anestezi uygulanmış bir farede S sinirinin dallarını nasıl bulacağınızı ve manipüle edeceğinizi iyi anlamış olmalısınız. Yıpranma testi ayrıca, kısmi periferik sinir hasarını takiben transgenik hayvanların veya ilaçların tepkisini test etmek için kantitatif bir fonksiyonel okumaya izin verir.