JoVE Encyclopedia of Experiments
İmmünoloji
0 görüntüleme • 4:42 dk • January 15th, 2026
Bir damla taze fare idrarı alın ve glikoz oksidaz, peroksidaz ve kromojen içeren bir glikoz tespit şeridini daldırın.
Glikoz oksidaz, idrar glikozunu oksitleyerek glukonolakton ve hidrojen peroksit oluşturur.
Ayrıca peroksidaz, kromojenin oksidasyonunu katalize etmek için hidrojen peroksit kullanır ve yoğunluğu idrar glikoz konsantrasyonu ile orantılı renkli bir ürün oluşturur.
İdrar glikozunun kalitatif değerlendirmesi için rengi şeridin referans tablosuyla karşılaştırın.
Kantitatif idrar glikoz ölçümü için, glikoz konsantrasyon standartlarına sahip çok kuyulu bir plaka ve belirli bir süre boyunca toplanan fare idrar örneğini alın.
Glikoz oksidaz, peroksidaz ve indikatör birleştirme reaktifleri içeren bir tahlil karışımı ekleyin.
Glikoz oksidaz, glikozun oksidasyonunu kolaylaştırarak glukonolakton ve hidrojen peroksit oluşturur. Peroksidaz, birleştirme reaktifleri ile hidrojen peroksit arasındaki reaksiyonu katalize ederek pembe renkli bir ürün oluşturur.
Bir mikroplaka okuyucu kullanarak, renkli ürünün emilimini ölçün.
Oluşturulan glikoz standart eğrisi ile idrardaki glikoz konsantrasyonunu belirleyin.
Düz bir yüzeye bir parça temiz parafilm yerleştirerek başlayın. Fareyi yavaşça kuyruğundan alın ve parafilmin üzerine yerleştirin.
Başparmağınızı ve işaret parmağınızı kullanarak fareyi tırnağından tutun ve farenin stres tepkisi olarak idrara çıkmasına neden olun. Parafilm yüzeyine bir damla idrar düşmesine izin verin ve ardından fareyi kafesine geri koyun.
Bir glikoz tespit şeridinin reaktif ucunu taze idrar damlasına batırın. Şeridi hemen çıkarın ve renkli tarafı yukarı bakacak şekilde düz bir yüzeye yerleştirin. Ardından, şerit üzerinde bir rengin tam olarak gelişmesi için en az 30 saniye bekleyin. Geliştirilen rengi, üretici tarafından sağlanan referans tablosu ile karşılaştırın.
Metabolik kafesi üreticinin talimatlarına göre monte edin ve besleme tertibatını toz haline getirilmiş yemekle doldurun, ardından üst haznedeki uygun metal tırnağa takın.
Su şişesi desteğini üst haznede kalan metal tırnağa sabitleyin. Boş su şişesini doldurun ve yudum borusunun delikte olduğundan emin olarak şişe desteğine kaydırın.
Metabolik kafese tek bir fare yerleştirin ve kafes kapağının düzgün şekilde takıldığından emin olarak kapakla örtün. İdrar toplama tüpünü ve dışkı toplama tüpünü alt hazne tabanındaki ilgili yerlerine yerleştirin.
24 saat sonra idrar toplama tüpünü alın ve idrar glikoz konsantrasyonunu belirlemek için bir glikoz tahlili yapın. Glikoz tahlili aynı gün yapılmayacaksa, idrar örneğini eksi 80 derecelik bir dondurucuda dondurun.
Dondurulmuş bir idrar örneği kullanıyorsanız, önce onu çözün. Tahlil kiti talimatlarına göre, desilitre başına 25 ila 0 miligram arasında değişen sekiz standart hazırlayın.
Standart kuyucukları ve idrar numunesi kuyularını, kit kılavuzuna göre tümü iki kez olmak üzere 96 oyuklu bir plakada hazırlayın. Tüm kuyucuklara önerilen miktarda enzim karışımı ekleyerek reaksiyonu başlatın. Plakayı örtün ve 37 santigrat derecede 10 dakika inkübe etmesine izin verin. Ardından, bir plaka okuyucu kullanarak 500 ila 520 nanometredeki absorbansı okuyun.
Verileri tahlil kiti talimatlarına göre analiz edin ve her bir standardın glikoz konsantrasyonuna karşı absorbansını çizin. 24 saatlik idrar örneğinin glikoz konsantrasyonunu belirlemek için bu grafiği kullanın. İdrar konsantrasyonu standart aralığın dışındaysa, idrar örneğini seyreltin.