JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:34 dk. • July 8th, 2025
Kaspaz-3 dahil olmak üzere birden fazla kaspaz üreten virüs ile enfekte memeli hücreleri ile başlayın.
Kontrol kuyusuna bir büyüme ortamı ve test kuyucuğuna kaspaz-3 inhibitörü takviyeli bir ortam ekleyin.
Kontrol kuyusunda, kaspaz-3, viral çoğaltma için gerekli olan viral nükleoproteinleri ve konakçı proteinleri tanır ve bozar.
Test kuyusunda, inhibitör hücreye girerek kaspaz-3 aktivitesini inhibe eder ve protein bozulmasını önler.
Hücreleri plakadan çıkarın. Hücre içi proteinleri serbest bırakarak hücre lizizini indüklemek için bir parçalama reaktifi ve ısı ekleyin.
Proteinleri boyuta göre ayırmak için her iki numuneyi de bir SDS-poliakrilamid jel ve elektroforez üzerine yükleyin.
Elektroforezden sonra, jeli bir lekeleme zarına aktarın.
Membranı viral nükleoproteinlere ve konakçı proteinlere karşı birincil antikorlarla tedavi edin.
Florofor konjuge ikincil antikorlarla yıkayın ve kaplayın, birincil antikorlarla bağlanarak floresan bantlar oluşturun.
Test numunesindeki daha yüksek floresan, kontrole kıyasla kaspaz-3 aracılı viral ve konakçı protein bölünmesinin azaldığını gösterir.
Başlamak için, MDCK veya A549 hücrelerini 12 oyuklu bir hücre kültürü plakasında tohumlayın, hücrele
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin