Virüsle enfekte hücrelerde viral ve konakçı proteinlerin kaspaz aracılı bölünmesinin değerlendirilmesi

0 görüntüleme3:34 dk • July 8th, 2025

Kaspaz-3 dahil olmak üzere birden fazla kaspaz üreten virüs ile enfekte memeli hücreleri ile başlayın.

Kontrol kuyusuna bir büyüme ortamı ve test kuyucuğuna kaspaz-3 inhibitörü takviyeli bir ortam ekleyin.

Kontrol kuyusunda, kaspaz-3, viral çoğaltma için gerekli olan viral nükleoproteinleri ve konakçı proteinleri tanır ve bozar.

Test kuyusunda, inhibitör hücreye girerek kaspaz-3 aktivitesini inhibe eder ve protein bozulmasını önler.

Hücreleri plakadan çıkarın. Hücre içi proteinleri serbest bırakarak hücre lizizini indüklemek için bir parçalama reaktifi ve ısı ekleyin.

Proteinleri boyuta göre ayırmak için her iki numuneyi de bir SDS-poliakrilamid jel ve elektroforez üzerine yükleyin.

Elektroforezden sonra, jeli bir lekeleme zarına aktarın.

Membranı viral nükleoproteinlere ve konakçı proteinlere karşı birincil antikorlarla tedavi edin.

Florofor konjuge ikincil antikorlarla yıkayın ve kaplayın, birincil antikorlarla bağlanarak floresan bantlar oluşturun.

Test numunesindeki daha yüksek floresan, kontrole kıyasla kaspaz-3 aracılı viral ve konakçı protein bölünmesinin azaldığını gösterir.

Başlamak için, MDCK veya A549 hücrelerini 12 oyuklu bir hücre kültürü plakasında tohumlayın, hücreleri gece boyunca %5'lik bir karbondioksit atmosferi altında 37 santigrat derecede inkübe edin. Ertesi gün, eski kültür ortamını hücrelerden çıkarın ve hücreleri her bir kuyucukta 1 mililitre serumsuz MEM ile iki kez yıkayın.

Daha sonra 400 mikrolitre influenza A virüsü aşısı ekleyerek hücreleri enfekte edin ve plakayı bir saat inkübasyon için yerleştirin. İnkübasyondan sonra, virüs aşısını çıkarın ve hücreleri MEM ile yıkayın. Her oyuğa 1 mililitre serumsuz MEM ekleyin ve hücreleri önceki adımda gösterildiği gibi inkübe edin.

24 saat sonra, hücreleri 1 mililitrelik bir şırınga pistonu ile kazıyarak hasat edin ve 1.5 mililitrelik bir tüpe aktarın. Tüpü oda sıcaklığında iki dakika boyunca 12.000 g'da santrifüjleyin ve süpernatanı toplayın. Hücre peletini 250 mikrolitre fosfat tamponlu salin ve santrifüj ile yıkayın. Süpernatanı çıkarın ve 100 mikrolitre hücre lizis tamponu ekleyin. Girdap ile karıştırın.

Hücreleri tamamen parçalamak için tüpü 98 santigrat derecede 10 dakika ısıtın. Ardından, enfekte olmamış ve enfekte olmuş numunelerden eşit miktarda proteini standart SDS poliakrilamid jel elektroforezi ile çözün. Elektroforezden sonra, protein jelini bir nitroselüloz veya PVDF membranına aktarın ve western blotlama yapın. Sahte muamele edilmiş ve inhibitör ile muamele edilmiş enfekte numune şeritlerindeki protein seviyelerini karşılaştırın.

08:41

Miyokard İnfarktüsü Sonrası Spectrofluorometry tarafından ölçülen Sıçan amigdala kaspaz-3 Etkinlik

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:23

Doğuştan İmmün Hücre Ölümünü Değerlendirmek için Kaspaz Aktivasyonunun Değerlendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:29

Florometrik Tahlil veya Akış Sitometrisi Kullanarak Kaspaz Aktivitesinin Ölçülmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:01

Makrofajlarda Multipl Kaspazların Aktivasyonunun Değerlendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:38

Test Bileşiklerinin Konakçı Hücrelerde Viral Giriş ve Füzyon Üzerindeki Etkisini Değerlendirmek İçin Bir Test

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:27

Bir Hipotalamik Hücre Modeli Apoptosisi Belirleyen Bir Kaspaz Çoğullama Testi Kullanımı

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:26

Teşhis edilmesi için kullanılan ilişkili Viral ve hücresel proteinler Viral DNA'ın arıtma

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:02

Araçlar Viral Immunomodulators ve ana bilgisayar Antiviral faktörler tanımlanması için eleme olarak Abdovirüs enfeksiyonlar

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:53

Bir Fluorogenic peptid bölünme tahlil için proteolitik aktivite ekran: coronavirus uygulamalarda spike protein etkinleştirme

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:40

Grup IV Viral SSHHPS In Vitro ve In Silico Yöntemleri Kullanılarak Analizi

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 29 Ağustos 2026