Bir Fare Modelinden Değişmez Doğal Öldürücü T Hücrelerinin İzole Edilmesi

Bir fareye intraperitoneal olarak sentetik bir glikolipid enjekte ederek başlayın.

Antijen sunan hücreler veya APC'ler, glikolipidi içselleştirir ve klasik olmayan MHC molekülü CD1d yoluyla sunar.

APC'ler dalağa göç eder ve değişmez doğal öldürücü T hücreleri veya iNKT hücreleri ile etkileşime girerek iNKT hücre aktivasyonunu ve proliferasyonunu indükler.

Dalağı hasat edin. Tek hücreli bir süspansiyon oluşturmak için mekanik olarak ayrıştırın.

Hücreleri bir tüpe aktarın. Lenfositleri ayırmak için bir yoğunluk gradyan ortamı ve santrifüj ekleyin.

Lenfositleri toplayın. iNKT hücreleri ile etkileşime giren glikolipid antijen yüklü florofor etiketli CD1d tetramerleri ekleyin.

Bağlanmamış tetramerleri çıkarın. Tetramer bağlantılı floroforlara bağlanan manyetik mikro boncuklarla kaplayın.

Bağlanmamış boncukları çıkarın ve hücre süspansiyonunu manyetik bir sütuna yükleyin.

Manyetik alan altında, boncuk bağlı iNKT hücreleri, kalan hücreler içinden akarken kolonda tutulur.

Sütunu manyetik alandan çıkarın. iNKT hücrelerini elüte etmek için bir elüsyon tamponu ekleyin.

Normal DBA / 1 fareyi, vücut ağırlığının kilogramı başına 0.1 miligram dozajında, alfa-GalCer ile intraperitoneal olarak enje