Kimerik Antijen Reseptörü T Hücreleri Üretmek için Ex Vivo Bir Teknik

İnterlökin-2 takviyeli bir ortamda antikor konjuge manyetik boncuklarla karıştırılmış birincil T hücrelerini alın ve inkübe edin.

Antikorlar, T hücresi reseptör kompleksinde ve ko-uyarıcı reseptör CD28'de CD3'e bağlanırken, interlökin-2, aynı kökenli reseptörüne bağlanarak T hücresi aktivasyonuna ve proliferasyonuna neden olur.

Bir kimerik antijen reseptörünü veya CAR'ı kodlayan transgenik bir RNA ile lentiviral vektörleri tanıtın ve inkübe edin.

Vektör-hücre zarı füzyonu üzerine, viral RNA, konakçı genomuna entegre olarak DNA'ya ters transkripsiyona uğrar.

Dönüştürülen T hücreleri, yüzeye bağlı CAR'ları ifade eder.

Hücreleri belirli aralıklarla hasat edin.

Kriyoprezervasyon için, bir dizi hücre alın, bağlı boncukları pipetleyerek ayırın ve manyetik olarak ayırın.

Hücreleri döndürün ve bir kriyoprezervasyon ortamında yeniden süspanse edin.

Hücreleri dondurun ve kriyojenik bir sıcaklıkta saklayın.

CAR ekspresyonunu değerlendirmek için, başka bir hücre alikotu alın, hücreleri aşağı doğru döndürün ve bir tamponda yeniden süspanse edin.

CAR'a özgü floresan etiketli bir antikor tanıtın ve akış sitometrisi kullanarak CAR ekspresyonunu tespit edin.

Taze veya dondurularak saklanmış birinci