Katyonik Polimer Kullanılarak Doğal Öldürücü Hücrelerde Viral Transdüksiyonun Arttırılması
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:21 dk. • July 8th, 2025
Doğal öldürücü veya NK hücrelerini ele alalım. Bir floresan proteini kodlayan viral enzimler ve mühendislik RNA molekülleri içeren lentivirüs vektörleri ekleyin.
Katyonik polimerler ekleyin ve hücreleri ve virüsleri çökeltin.
Polimerler hem virüs hem de hücre üzerindeki negatif yükleri nötralize ederek zar füzyonunu kolaylaştırır.
RNA, DNA'ya ters kopyalanır ve konakçı genomuna entegre edilir, bu da floresan protein ekspresyonunu sağlar.
Sitokin interlökin-2 veya IL-2 ile takviye edilmiş ortam ekleyin.
IL-2, transgen ekspresyonunu korurken NK hücre sağkalımını ve proliferasyonunu destekleyen hücre içi sinyallemeyi tetikler.
Karışımı, NK hücreleri üzerindeki spesifik immünoreseptörlere bağlanan ve onları antiviral sitokinleri serbest bırakmaları için tetikleyen antikorlarla kaplanmış bir kuyuya aktarın.
Polimerin sitokin üretimi üzerindeki etkisini değerlendirmek için salınan sitokinlerin miktarını belirleyin.
Nekrotik hücrelerin DNA'sını etiketlemek için floresan boyalar ekleyin.
Akış sitometrisini kullanarak, canlı hücreleri tanımlayın ve polimer kaynaklı transdüksiyonun verimliliğini ölçmek için floresan proteinin sinyalini nicelleştirin.
Fare veya insan birincil NK hücrelerini,
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin