JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 2:57 dk. • July 8th, 2025
Yeşil floresan proteinleri kodlayan in vitro transkribe mRNA'ları içeren bir tüp ile başlayın.
mRNA, bağışıklık tepkisini önleyen ve mRNA stabilitesini artıran modifiye nükleotidler, 5-metil-sitidin trifosfat ve psödouridin trifosfat içerir.
mRNA'nın 5' ucu defosforile edilir ve makrofajlar üzerindeki örüntü tanıma reseptörleri tarafından tanınmasını önler.
mRNA'ya katyonik lipid bazlı bir transfeksiyon reaktifi ekleyin, mRNA'nın elektrostatik etkileşimler yoluyla kapsüllenmesini kolaylaştırın ve bir kompleks oluşturun.
Lipid-mRNA komplekslerini, yapışmış fare türevli primer makrofajlar içeren çok kuyucuklu bir plakaya yerleştirin ve homojen karıştırma için hafifçe çalkalayın.
Makrofajlar, mRNA içeren kompleksi bir endozoma içselleştirir. Daha sonra kompleks endozomal zar ile birleşerek mRNA'ları hücre sitoplazmasına bırakır.
3' ucundaki poli-A kuyruğu, yeşil floresan proteinleri üretmek için protein sentezine uğrayan mRNA'yı stabilize eder.
Bir floresan mikroskobu altında, makrofajlar içindeki yeşil floresan, modifiye mRNA'larla başarılı transfeksiyonu önerir.
Önceden hesaplanmış mRNA transfeksiyon tamponu hacmini eksi mRNA transfeksiyon reaktifi ve mRNA'yı bir reaksiyon tüpüne ek
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin