Herpes Simpleks Virüsü ile Enfekte İmmatür Dendritik Hücrelerde Otofajinin siRNA Bazlı İnhibisyonu

İki elektroporasyon küveti alın. Bir küvet, otofajiyi indükleyen bir protein olan FIP200'ün üretimini engellemek için tasarlanmış küçük bir enterferans yapan RNA veya siRNA içerir.

İkinci küvet, FIP200 üretimini engellemeyen bir kontrol olarak karıştırılmış bir siRNA içerir.

Olgunlaşmamış dendritik hücreler veya iDC'ler ekleyin; siRNA'nın hücresel girişi için elektroporat yapın ve ardından hücreleri plakalayın.

İçselleştirilmiş siRNA, RNA'yı indükleyen bir susturma kompleksine bağlanır.

FIP200'e özgü siRNA'ya sahip kompleks, hedef mRNA'sını parçalayarak FIP200 üretimini inhibe ederken, kontrol siRNA ile muamele edilen iDC'ler FIP200 üretir.

Hücreleri toplayın ve herpes simpleks virüsünü ekleyin. Viral zarf-hücre zarı füzyonu üzerine, salınan DNA çekirdeğe girer ve viral proteinlerin ve nükleokapsidlerin üretimine yol açar.

Viral proteinler nükleer laminleri bozar. FIP200, bozulmuş laminlerin otofajisini indükleyerek onları bozunma için hedefleyen ve viral nükleokapsidlerin sitoplazmaya kaçmasını kolaylaştıran bir sinyal kaskadını tetikleyen bir kompleks oluşturur.

FIP200 üretiminin siRNA aracılı inhibisyonu, lamin otofajiyi kısıtlayarak nükleokapsid kaçışını önler.

Hücreler, siRNA'