Bir Murin Modelinde Otoimmün Artrit için Hücre Bazlı Bir Tedavi

Ovalbümine özgü reseptörleri eksprese eden iPSC'den türetilmiş düzenleyici T hücrelerini veya Treg'leri alın. Onları kısıtlanmış bir farenin kuyruk damarına enjekte edin.

Hücreler, diz eklemi kapsülünün iç yüzeyini kaplayan sinovyal zara ulaşır.

Daha sonra, bir adjuvan ile emülsifiye edilmiş metillenmiş sığır serum albümini veya mBSA'yı uygulayın.

Adjuvanlar, mBSA'nın antijen sunan hücrelere veya fragmanları MHC molekülleri aracılığıyla işleyen ve sunan APC'lere sunumunu arttırır.

APC'ler lenf düğümlerine göç ederek T hücresi aktivasyonunu indükler. Aktive edilmiş T hücreleri diz eklemine göç eder.

Sırasıyla sol ve sağ diz eklemlerine tek başına mBSA ve ovalbümin ile mBSA enjekte edin.

Sol dizde, APC'ler mBSA fragmanlarını aktive edilmiş T hücrelerine sunarak proinflamatuar sitokin salınımını tetikler ve artrit adı verilen doku hasarına ve eklem şişmesine yol açar.

Sağ dizde, Treg'ler ovalbümin sunan APC'lerle etkileşime girer ve anti-inflamatuar sitokinleri serbest bırakır, doku hasarını ve eklem şişmesini azaltır, böylece artriti iyileştirir.

İlgilenilen hücre kültürlerini tripsin ile ayırarak ve her hücre tipini 10 mililitre taze ortamda yeniden süspanse ederek başlayın. Her hücre kültürünü 10 santimetrelik yeni bir kabın içine koyun ve besleyici hücrelerin hücre kültürü inkübatörüne yapışmasına izin verin. 30 dakika sonra, yüzen iPSC'leri toplayın ve kültürleri, sayım için hücre kümelerini çıkarmak için ayrı ayrı 70 mikronluk hücre süzgeçlerinden geçirin.

Her bir kültürü soğuk PBS'de mililitre başına 1.5 x^{10 7} hücre konsantrasyonunda yeniden süspanse edin ve gerektiği gibi tekrar süzün. Daha sonra, 4 ila 6 haftalık dişi C57BL6 farelerini birer birer küçük bir hayvan tutucusuna yerleştirin ve her bir hayvanın kuyruk damarına fare başına 200 mikrolitre bir hücre türünü evlat edinerek aktarın.

Temel ölçümü belirlemek için her iki dizin şişmesini ölçmek için bir kadranlı gösterge kumpası kullanın. Hücre transferinden 10 gün sonra, farelere her deney hayvanının kuyruğunun tabanında tam Freund adjuvanında emülsifiye edilmiş 100 mikrogram metillenmiş BSA enjekte etmek için 1 mililitrelik bir şırınga kullanın.

Hücre transferinden 17 gün sonra, sol diz eklemine 10 mikrolitre PBS'de 20 mikrogram metillenmiş BSA ve 20 mikrogram metillenmiş BSA ve 10 mikrolitre PBS'de 100 mikrogram tam ovalbüminin eklem içi enjeksiyonu ile artriti indükleyin

.

Artriti indükledikten yedi gün sonra, diz çapındaki yüzde artışın hesaplanması için dizleri tekrar ölçün ve patellaları cerrahi olarak çıkarın. Eklemleri formalin içinde sabitleyin. Daha sonra, EDTA'da dekalsifikasyondan sonra, dizleri parafine gömün ve histokimyasal boyama ve analiz için 4 mikronluk kesitler elde edin.