JoVE Encyclopedia of Experiments
İmmünoloji
0 görüntüleme • 2:16 dk • July 8th, 2025
Anestezi uygulanmış bir fare ile başlayın ve farenin burnundan hastalığa neden olma kabiliyetini azaltan canlı zayıflatılmış bir BCG Mycobacterium bovis suşu uygulayın.
Enjekte edilen bakteriler, akciğer dokusunda ve yakındaki lenf düğümünde bir bağışıklık tepkisini uyarır.
Bu, farenin dolaşımına giren efektör T hücrelerinin ve B hücrelerinin oluşumuna yol açar.
Efektör B hücreleri, mikobakterilere karşı antikorlar üretir.
Bu arada, efektör T hücreleri, yerleşik bellek T hücreleri veya TRM hücreleri olarak akciğer dokusuna yerleşir ve uzun süreli bağışıklık sağlar.
Bağışıklamanın etkinliğini değerlendirmek için, farenin burnundan hastalığa neden olma kabiliyetine sahip canlı, öldürücü mikobakterileri uygulayın.
Bu, akciğer dokusundaki TRM hücrelerinin aktivasyonunu tetikler.
Aktive edilmiş TRM hücreleri, efektör B hücreleri de dahil olmak üzere diğer bağışıklık hücrelerini çekerek sitokinleri serbest bırakır.
Bu B hücreleri, mikobakterilere bağlanan antikorlar salgılar ve nötrofiller tarafından klirenslerini arttırır ve bu da başarılı bir bağışıklamayı gösterir.
İntranazal uygulama için, 20 mikrolitre BCG süspansiyonu içeren bir mikropipet yükleyin ve anestezi uygulanmış fareyi başlığın içine sırtüstü pozisyonda yerleştirin. 20 mikrolitrelik hacmin tamamı birikene kadar aşıyı iki burun deliği arasında damla damla uygulayın ve farenin süspansiyonu solumasına izin vermek için damlalar arasında zaman bırakın. Ardından, mikropipeti 20 mikrolitre bakteri ile yeniden doldurun ve uygulamayı tekrarlayın.
H37Rv Mycobacterium tuberculosis suşu ile burun içi zorluk için, aşılamadan sonraki uygun deneysel zaman noktasında, hayvanları az önce gösterildiği gibi 40 mikrolitre H37Rv bakteri süspansiyonunun intranazal uygulaması ile aşılayın.