JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 2:58 dk. • July 8th, 2025
Soğuğa adapte olmuş bir influenza suşunun belirli viral esansiyel proteinlerini kodlayan cDNA taşıyan çift yönlü plazmitlerle başlayın.
Farklı bir influenza suşundan hemaglutinin ve modifiye nöraminidaz cDNA içeren yeni bir çift yönlü plazmit setini tanıtın.
Bu karışıma bir transfeksiyon reaktifi ekleyin ve plazmitlerle bir kompleks oluşturmak için inkübe edin.
Hücreye plazmit girişini sağlamak için bu kompleksleri kültürlenmiş insan epitel benzeri hücrelere aktarın.
Zıt yönelimlerde iki promotöre sahip çift yönlü plazmitler, viral proteinlerin ve bunlara karşılık gelen RNA'nın üretimini sağlar.
Hücreleri daha düşük bir sıcaklıkta inkübe edin.
Viral proteinler ve viral RNA'lar, daha sıcak koşullarda daha az replikasyon ile soğuğa adapte olmuş rekombinant influenza virüsleri oluşturmak için kendi kendine birleşir.
Sialik asit aşırı eksprese eden MDCK hücreleri ve viral bağlanma ve hücrelerin içine girmeye izin veren modifiye tripsin enzimleri ile kaplama.
Yeni virüslerin replikasyonunu ve üretimini indüklemek için aynı sıcaklıkta inkübe edin.
Bir aşı hazırlığı için hazır olan rekombinant canlı zayıflatılmış influenza virüslerini santrifüjleyin ve hasat edin.
Başlamak için, %10 fetal
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin