Tümör Sferoidlerinde Sızan T Hücrelerinin Üç Boyutlu Ko-Kültür Modeli

Bir agaroz dökümü içeren bir kültür plakası ile başlayın. Döküm, birden fazla mikro kuyuya sahip bir tohumlama odası içerir.

Her mikrokuyu, bir kültür ortamında bir tümör sferoidi içerir. Sferoidler, tümör hücrelerinin üç boyutlu agregatlarıdır.

İlk olarak, agaroz dökümünü çevreleyen ortamı çıkarın. Ardından, sferoid kaybını önlemek için döküm içindeki ortamı tohumlama odasının bir köşesinden çıkarın.

Tümöre özgü T hücrelerinin tohumlama odasına damla damla bir süspansiyonu yerleştirin ve hücrelerin sferoidleri içeren mikro kuyucuklara yerleşmesine izin verin.

Daha sonra, agaroz dökümünün etrafına bir kültür ortamı ekleyin ve bir ko-kültür geliştirmek için plakayı fizyolojik koşullar altında inkübe edin.

İnkübasyon sırasında, T hücreleri sferoidi çevreler. T hücrelerinin bir alt kümesi sferoide sızarken, diğerleri periferde kalır ve üç boyutlu bir ko-kültür modeli oluşturur.

Bir T hücresi ko-kültürü oluşturmak için, oyuk başına 190 mikrolitre uygun bir T hücre kültürü ortamında uygun sayıda T hücresini yeniden süspanse edin ve önce agarozu çevreleyen hücre kültürü ortamının çıkarılmasına izin vermek için 12 oyuklu plakayı eğin, daha sonra tohumlama odasında, sferoidleri çıkarmadan.