İnterlökin-10 Eksikliği Olan Bir Farede Fekal Mikrobiyota Transplantasyonunun Etkilerinin Değerlendirilmesi

Kolon iltihabına neden olan bir anti-inflamatuar sitokin olan interlökin-10'dan yoksun kısıtlı bir fare ile başlayın.

Sağlıklı bir fareden çeşitli bağırsak mikropları açısından zengin bir dışkı süspansiyonu ile doldurulmuş bir şırınga alın.

Ardından, şırıngaya oral bir tüp takın.

Bu tüpü ağzın içine yerleştirin ve farenin midesine doğru aşağı doğru yönlendirin.

Şimdi, dışkı süspansiyonunu doğrudan mideye uygulayın ve yavaş yavaş kolona ulaşmasına izin verin.

Kolona girdikten sonra, dışkı mikropları çoğalır ve kolonize olur, bağırsak mikroplarını yeniden oluşturur.

Kolonize mikroplar daha sonra çeşitli ikincil metabolitleri serbest bırakır.

Bu metabolitler, kolon epitelini onaran ve bağırsak bütünlüğünü geri kazandıran müsin üretimine yardımcı olur.

Kolon epiteli içinde, dışkı mikropları ve metabolitleri bağışıklık hücreleri ile etkileşime girer.

Bu etkileşim, bağışıklık hücrelerinin anti-inflamatuar sitokinler salmasına neden olarak, interlökin-10 eksikliği olan farede kolon iltihabında bir azalmaya yol açar.

Normal tuzlu suya% 10 gliserol çözeltisi ekleyerek steril bir çözelti hazırlayın. Her gram dışkı peleti için konik tüpe bu çözeltiden 10 mililitre ekleyin. Dışkıyı yeniden süspanse etmek için çeker ocak içinde bir tezgah üstü homojenizatör kullanarak bu karışımı 30 saniye boyunca üç kez düşük hızda homojenize edin. Dışkı süspansiyonunu iki kat steril pamuklu gazlı bezden süzün. Süzüntüyü geçici olarak buzdolabında altı saate kadar saklayın veya steril kriyojenik şişelere paketleyin ve eksi 80 derecelik bir dondurucuda saklayın.

Homojenizatörü veya blenderi standart bir prosedür izleyerek iyice temizleyin. Dondurulmuş numuneler kullanıyorsanız, donmuş dışkı süspansiyonunu buz üzerinde çözdürün. Çözülmüş dışkı süspansiyonunu girdap yaparak karıştırın. Taze veya çözülmüş dışkı süspansiyonunu 1 mililitrelik şırıngalara aktarın. Fareleri tartın ve doğru gavaj iğnesi boyutunu ve maksimum dozaj hacmini seçin.

Farenin burnunun ucundan sternumun dibine kadar olan uzunluğu ölçerek gavaj iğnesini test edin. Şırıngayı salin veya dışkı süspansiyonunda% 10 gliserol ile doldurun ve şırınganın ve iğnenin içindeki hava kabarcıklarını çıkarın. Biyogüvenlik kabinine bir fare kafesi yerleştirin, plastik kafes kapağını çıkarın ve metal rafı yerinde bırakın.

Metal rafı tek elinizle açın. Bir fareyi kuyruğundan tutun ve metal rafa koyun. Fareyi bir elinizle kuyruğundan tutun ve diğer elinizin baş ve orta parmaklarını kullanarak deriyi omuzların üzerinden kavrayarak hayvanı dizginleyin. Hayvanın başını yavaşça geriye doğru uzatın ve bir elinizle başını yerinde tutun. Gavaj iğnesini ağzın içindeki dilin üzerine yerleştirin.

İğne yemek borusuna ulaşana kadar üst damak boyunca yavaşça ilerleyin. İğneyi tek hareketle sorunsuz bir şekilde geçirin. İğne düzgün bir şekilde yerleştirildikten ve doğrulandıktan sonra, iğneye bağlı şırıngayı iterek malzemeyi yavaşça uygulayın. Dozlamadan sonra iğneyi yavaşça dışarı çekin. Fareyi işaretleyin ve ev kafesine geri koyun. Nefes almada zorluk veya sıkıntı belirtileri arayarak hayvanı 5 ila 10 dakika izleyin. Fekal mikrobiyota transplantasyonundan 12 ila 24 saat sonra fareleri tekrar izleyin.