Tümöre Özgü CAR T Hücrelerinin Anti-Tümör Aktivitesini Değerlendirmek için İn Vitro Test

B hücresine özgü bir yüzey antijeni ve bir sitoplazmik lusiferaz enzimi eksprese eden B hücreli lenfoma tümör hücrelerini içeren çok kuyulu bir plaka alın.

CAR T hücrelerini seçilen kuyucuklara yerleştirin ve inkübe edin. Hücreler, tümör antijenini ve hücre içi sinyal alanlarını hedefleyen hücre dışı bir alan içeren kimerik antijen reseptörlerini veya CAR'ları eksprese eder.

CAR, tümör antijenine bağlanarak CAR T hücrelerinin aktivasyonunu indükler.

Aktive edilmiş hücreler, hücrelerin anti-tümör aktivitesini destekleyen sitokinleri serbest bırakarak toksinlerin salınmasını tetikler.

Toksinler tümör hücrelerine girer ve hücre ölümüne neden olur.

Hücreleri aşağı doğru döndürün ve süpernatanı izole edin. CAR T hücresi aktivitesini değerlendirmek için sitokinleri ölçün.

Hücreleri, biyolüminesan bir substrat olan lusiferin içeren bir tamponda yeniden süspanse edin.

Girişte, lusiferin canlı tümör hücrelerinde lusiferaz ile oksitlenir ve ışık yayar.

Tedavi edilen tümör hücrelerinde azalmış bir sinyali tanımlamak için biyolüminesansı ölçün ve CAR T hücresi aracılı sitotoksisiteyi doğrulayın.

İlk olarak, lusiferaz ekspresyonu olan veya olmayan 10.000 sinjeneik hedef CD19 pozitif tümör hücre