JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 2:55 dk. • July 8th, 2025
Doğal öldürücü veya NK hücreleri ve kanser hücreleri içeren çok kuyulu bir plaka alın. Kontrol kuyuları sadece kanser hücrelerini içerir.
Hücresel teması kolaylaştırmak için santrifüjleyin.
Kuluçkaya yatmak. NK hücreleri üzerindeki aktive edici reseptörler, kanser hücresi yüzey ligandlarına bağlanarak NK hücrelerinin sitotoksik moleküller içeren granülleri serbest bırakmasını tetikler.
Bu moleküller kanser hücresi zarı gözenekleri oluşturur ve laktat dehidrojenaz veya LDH dahil olmak üzere hücre içi içerikleri serbest bırakarak apoptozu indükler.
Maksimum LDH salınımı için kontrol kuyularındaki kanser hücrelerini parçalamak için bir deterjan ekleyin.
LDH içeren süpernatanların bir kısmını santrifüjleyin ve bir test plakasına aktarın.
Tahlil reaktifini ekleyin ve inkübe edin.
LDH, laktatı piruvata dönüştürerek NAD + 'yı azaltır. Diaphorase, tetrazolium tuzunu azaltmak için NADH kullanır ve kırmızı renkli bir formazan ürünü oluşturur.
Enzimatik reaksiyonu durdurmak için asidik bir çözelti ekleyin.
Kuyucuklardaki formazan emilimini ölçmek için bir mikroplaka okuyucu kullanın.
Formazan yoğunluğu, test kuyucuğundaki parçalanmış kanser hücrelerinin sayısı ile orantılıdır ve kanser hücrel
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin