JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 1:49 dk. • July 8th, 2025
Bir büyüme ortamında kolorektal kanser sferoidleri içeren çok kuyulu bir plaka alın.
Sferoidler, fizyolojik tümör mikro çevresine benzeyen kanser hücrelerinin üç boyutlu agregatlarıdır.
Büyüme ortamını çıkarın ve artan konsantrasyonlarda Lactobacillus hücresiz süpernatan veya sindirim sisteminin bir bakterisi olan Lactobacillus kültüründen elde edilen kültür süpernatanı olan LCFS'yi ekleyin.
LCFS bakteri hücrelerinden yoksundur, ancak bakteriler tarafından salgılanan antikanser aktiviteye sahip aktif metabolitler içerir.
LCFS'deki bakteriyel metabolitler, sferoiddeki kanser hücreleri ile etkileşime girerek apoptozu indükler ve hücre ölümüne yol açar.
Hücrelerin hasar görmesi, sferoid morfolojisinin bozulmasına neden olur.
Bir mikroskop kullanarak, bakteriyel metabolitlerin doza bağlı antikanser aktivitesini gösteren, artan LCFS konsantrasyonu ile hücre ölümünde bir artış gözlemlemek için LCFS ile tedavi edilen sferoidleri inceleyin.
LCFS tedavisi için, hazırlanan çözülmüş LCFS stok çözeltisini taze büyüme ortamında %25, 12.5 ve %6 konsantrasyonlara seri olarak seyreltin ve kaplanmış kolorektal kanser hücre hattı kültürlerinin her bir oyuğundan mümkün olduğunca fazla süpernatanı dikkatlice çıkarmak için 200 mikrolitrelik bir pipet kullanın.
Daha sonra, her bir kanser hücresi setine üç nükte halinde 200 mikrolitre LCFS takviyeli büyüme ortamı ekleyin ve plakayı 24 ila 48 saat daha inkübatöre geri koyun.