İnsan Karaciğer Hücreleri ve Bağışıklık Hücreleri ile İnsanlaştırılmış Bir Fare Modeli Geliştirme

Çeşitli bağışıklık hücrelerinden yoksun, anestezi uygulanmış, bağışıklık yetmezliği olan bir fare ile başlayın.

Bu transgenik fare, bir antiviral ve bir kemoterapötik ajan ile ön işleme tabi tutulur. Antiviral ajan, yalnızca transgenik karaciğer hücrelerinde bulunan viral proteinlerle etkileşime girerek bunların ortadan kaldırılmasını teşvik eder.

Bu arada, kemoterapötik ajan, kemik iliğindeki aktif olarak bölünen kök hücreleri ortadan kaldırarak bağışıklık hücresi üretimi için bir niş oluşturur.

Fareyi inceleyin ve dalağı ortaya çıkarın.

İnsan karaciğer hücrelerinin ve hematopoietik kök progenitör hücrelerin veya HSPC'lerin hücre süspansiyonunu alın ve bunları dalağın alt kutbuna enjekte edin.

Hücreleri alt kutupla sınırlamak ve fare dolaşımına girişlerini kolaylaştırmak için dalağı enjeksiyon bölgesinin üzerine bağlayın.

Kesi kapatın.

Enjekte edilen karaciğer hücreleri karaciğer dokusuna ulaşır ve fare modelinde insan karaciğer hücrelerini oluşturur.

Kemik iliğinde, göç etmiş HSPC'ler çeşitli insan bağışıklık hücrelerine farklılaşır.

Bu, insan karaciğer hücreleri ve bağışıklık hücreleri ile ikili insanlaştırılmış bir fare modeli geliştirir.

İlk olarak, steril bir uzatma tüpünün bir ucunu 30 gauge bir iğneye ve diğer ucunu 1 mililitrelik bir şırıngaya takın. Şırıngayı, havuzlanmış HEP'lerin ve HSPC'lerin süspansiyonu ile doldurun. Şırıngayı tekrarlayan bir dağıtım pipetinin çentiğine yerleştirin ve dağıtıcıyı her basışta 10 mikrolitre dağıtacak şekilde ayarlayın. Her fareyi metin protokolünde belirtildiği gibi tıraş edin ve her farenin gövdesinin sol tarafını %10 povidon-iyot ve ardından %70 izopropil alkol ile ovalayın.

Vannas tipi makas kullanarak, göğüs kafesinin alt kenarının yaklaşık 5 milimetre altındaki periton boşluğuna girmek için periton duvarının solundaki deri, kas ve karın zarında küçük bir kesi yapın. Dalağı bulun ve kolay erişim için ameliyat alanına hafifçe çekmek için forseps kullanın ve 30 gauge iğneyi dalağın alt kutbuna sokun.

Ardından, dağıtım pipetinin pistonunun kilidini açın ve dalak başına 60 ila 80 mikrolitre sınırıyla bir seferde 10 mikrolitre hacim dağıtın. İğneyi yavaşça geri çekin ve dalağı bir ligasyon uygulayıcısı kullanarak bağlama klipsleriyle klipsleyin. Ardından, dalağı vücut boşluğuna geri itmek için steril PBS ile ıslatılmış pamuk uçlu aplikatörler kullanın. Karın duvarının kas tabakasını kapatmak için kesintili bir dikiş paterni kullanın. Emilemeyen dikişler kullanarak kesintili bir dikiş paterni ile cilt kapanışını gerçekleştirin.