Antijene Özgü CAR T Hücrelerinin Üretilmesi için Bir Teknik

Rekombinant fibronektin fragmanları ile kaplanmış bir mikrokuyu plakası alın ve aktive edilmiş murin CD8 pozitif T hücreleri ekleyin.

Bir kimerik antijen reseptörünü veya CAR'ı kodlayan transgenik bir RNA içeren retroviral vektörleri tanıtın.

Kontaminasyonu önlemek için plakayı örtün ve bir torbaya koyun. Virüs-hücre etkileşimini kolaylaştırmak için plakayı düşük hızda santrifüjleyin.

Fibronektin, virüse ve hücreye bağlanır ve virüs aracılı gen transferini arttırmak için onları birlikte lokalize eder.

Santrifüjleme sonrası, kapalı torbayı çıkarın ve plakayı fizyolojik koşullar altında inkübe edin.

Viral vektörün zarfı hücre zarı ile birleşerek viral RNA ve enzimleri serbest bırakır.

Viral enzimler, salınan RNA'yı ters kopyalar ve elde edilen DNA'yı konakçı genomuna entegre ederek hücrelerin yüzeye bağlı CAR'ları ifade etmesini sağlar.

CAR, hedef antijene özgü bir antijen bağlama alanı ve T hücresi aktivasyonu için sinyal alanları içerir.

Antijene özgü CAR T hücreleri, aşağı akış tahlilleri için hazırdır.

1. günde, 24 oyuklu bir plakanın kuyucuklarına 0,5 mililitre Fibronektin ekleyerek ve gece boyunca 4 santigrat derecede inkübe ederek insan fibronektin fragmanı kaplı plakaları haz