Aşılama Amaçlı mRNA Yüklü Nanopartiküllerin Formüle Edilmesi

JoVE Encyclopedia of Experiments

İmmünoloji

0 görüntüleme • 2:43 dk • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pozitif yüklü polimerler içeren donmuş bir polimer çözeltisi ile başlayın.

Polimer çözeltisini oda sıcaklığına ulaşana kadar çözdürün.

Homojen bir çözelti elde ederek homojen bir karışım elde etmek için bir tampon ve girdap ekleyin.

Optimum reaksiyon için hedef mRNA'yı polimer çözeltisine eşit oranda ekleyin.

Pozitif yüklü polimerlerin elektrostatik etkileşimler yoluyla mRNA'daki negatif yüklü fosfat grupları ile etkileşime girmesine izin vermek için inkübe edin.

Bu, mRNA'nın polimer yapısına dahil edilmesini kolaylaştırır ve mRNA-polimer komplekslerinin veya poliplekslerin nanopartiküllerini oluşturur.

Bu polipleksleri RNaz içermeyen su içeren bir tüpe aktarın.

Bunları karıştırın ve poliplekslerin çökelmesine izin verin.

Sükroz içeren bir tampon ekleyin ve dondurun. Sükroz, poliplekslerin yapısal bütünlüğünü koruyan bir kriyoprotektan görevi görür.

Ardından, su kalıntılarını gidermek için dondurarak kurutma yapın.

İleride kullanmak üzere bir mRNA aşı adayı olarak düşük bir sıcaklıkta saklayın.

Polipleks oluşumu için, önceden hazırlanmış polimerler C-6 peptit poli-beta amino esterlerini çözün ve çözeltiyi girdaplayın. Polimer karışımını yukarı ve aşağı pipetledikten sonra, sodyum asetat içinde 12,5 milimoluk bir çözelti hazırlayın. Solüsyonu girdaplayın ve 10 dakika bekleyin.

Daha sonra, mRNA'yı mililitre başına 0,5 miligramda hazırlayın ve pipetleyerek karıştırın. Polimer çözeltisini tekrar girdaplayın. Daha sonra, polimer çözeltisindeki genetik materyal çözeltisini bir mikrosantrifüj tüpünde bire bir oranında karıştırın ve tüpü bir termal blokta 30 dakika boyunca 25 santigrat derecede inkübe edin. İnkübasyondan sonra, numuneyi suyu içeren bir mikrosantrifüj tüpüne ekleyerek karışımı bir ila iki RNaz içermeyen su ile çökeltin.

Daha sonra, yardımcı maddeleri dahil etmek için, mRNA ve poli-beta amino esterlerin karışımı ile aynı hacimde 20 milimolar HEPES ve yüzde 4 sükroz çözeltisi ekleyin ve pipetleme ile karıştırın. Liyofilizasyon için, polipleks çözeltiyi eksi 80 santigrat derecede bir saat dondurduktan sonra, birincil kurutmayı gerçekleştirin, ardından yeniden hidrasyonu önlemek için polipleksleri hemen eksi 20 santigrat derecede saklayın.

09:09

Hedeflenen İlaç Teslimatı için Doxorubicin Yüklü Aptamer-PEI-g-PEG Modifiye Altın Nanopartiküllerinin Sentezi

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:02

Mikroakışkan Cihaz Kullanılarak siRNA Yüklü Lipid Nanopartiküllerinin Üretimi

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:16

Peptit-Poloksamin Nanopartikülleri Kullanılarak Kültürlenmiş Hücrelerde In vitro Transkribe mRNA'nın Verimli Transfeksiyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:07

Nanopartikül Aşılama sonrası analizi antijene özgü CD8 + T hücresi tepkileri için tüm hayvan Görüntüleme ve Akış Sitometrisi Teknikleri

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:29

Vitro verimli bir şekilde teslim için katyonik Nanoliposomes nesil mesajcı RNA transkripsiyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:58

Trimerik Epitop Sunumu Gerektiren Aşılar için E. coli-expressed Self-Assembling Protein Nano tanecikleri Üretimi

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:41

Mikroakışkan Karıştırma Platformu Kullanarak Gen Teslimatı için Lipid Nanopartiküllerinin Formülei ve Karakterizasyonsu

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:27

Aşı Amacıyla mRNA Yüklü Poli (Beta Aminoesterler) Nanopartiküllerinin Sentezi ve Karakterizasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:07

SARS-CoV-2 Reseptör Bağlama Etki Alanını Gösteren Dış Membran Veziküllerine Dayalı Bir "Tak ve Görüntüle" Nanopartikül Aşı Platformu

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:55

Mikroakışkan Karıştırma ile Formüle Edilen mRNA-Lipid Nanopartiküllerin In Vitro ve In Vivo Etkinliğinin Test Edilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 22 Ağustos 2026