Afinite Kromatografisi Kullanılarak Kendi Kendine Birleşen Protein Nanopartiküllerinin Saflaştırılması

Polihistidin etiketli rekombinant kendi kendine birleşen protein nanopartiküllerini ifade eden mühendislik ürünü bakterilerin bir süspansiyonunu alın.

Hücre içi bileşenleri serbest bırakmak için sonikat.

Süpernatan içeren protein nanopartiküllerini toplamak için santrifüjleyin. İmidazol içermeyen bir tamponla seyreltin.

İmmobilize nikel katyonları olan agaroz boncukları içeren bir afinite kromatografi sütunu alın.

Kolon dengelemesi için düşük imidazol konsantrasyonuna sahip bir tampon ekleyin.

Bakteriyel lizatı kolona ekleyin.

Çalışma sırasında, protein nanopartikülleri üzerindeki polihistidin, nikel katyonları ile güçlü bir şekilde bağlanır.

Bu arada, bakteriyel lipopolisakkaritler ve diğer proteinler gibi kirleticiler kolona zayıf bir şekilde bağlanır.

Zayıf bağlı proteinleri çıkarmak için düşük imidazol konsantrasyonu içeren bir tampon ile yıkayın.

Lipopolisakkaritleri çıkarmak için izopropanol ekleyin ve ardından yıkayın.

Daha sonra, bir ara imidazol konsantrasyonuna sahip bir tampon yerleştirin. İmidazol, nikel katyonuna bağlanmak için histidin ile rekabet eder ve bağlı protein nanopartiküllerini serbest bırakır.

Daha sonra, protein nanopartiküllerini tamamen elüte etmek için