HIV'e Karşı Tasarlanmış Bağışıklığa Sahip İnsanlaştırılmış Bir Fare Modeli Oluşturma

Anestezi uygulanmış, ciddi şekilde bağışıklığı baskılanmış bir alıcı fare hazırlayın.

Böbreği açığa çıkarmak için bir kesi yapın ve böbrek kapsülünde bir delik oluşturun.

Jelatinli bir protein karışımı içinde süspanse edilmiş insan fetal timus dokusu ve fetal karaciğer türevi hücreleri içeren bir implant iğnesi alın.

Hücreler, HIV'e karşı hedeflenen kimerik antijen reseptörlerini veya CAR'ları eksprese eden tasarlanmış hematopoietik kök hücreleri veya HSC'leri içerir.

Hücre süspansiyonunu ve timus dokusunu kapsülün altına implante edin, ardından kesiyi kapatın.

Daha sonra, CAR eksprese eden HSC'leri retro-orbital olarak enjekte edin ve farenin iyileşmesine izin verin.

Böbrekte, jelatinimsi protein karışımı, HSC'leri implantasyon bölgesinde tutarak bir matris halinde polimerize olur.

Matris HSC'ler timusa göç eder ve fonksiyonel insan T hücrelerine farklılaşır.

Bu arada, retroorbital olarak enjekte edilen HSC'ler kemik iliğine ulaşır ve fonksiyonel insan B hücrelerine, monositlere ve NK hücrelerine farklılaşır.

HIV'e karşı insan bağışıklık sistemine sahip fare modeli artık hazır.

Şişeden timus parçalarını ve ortayı 60 milimetrelik bir tabağa dökün. Bazı pozitif yer değiştirmeli pipet uçlarını buz üzerinde açık 1,5 mililitrelik steril vidalı kapaklı tüplere yerleştirerek soğutun. Ayrıca, hücre peletlerini ve Matrigel gibi bir miktar jelatinimsi protein karışımını buzun üzerine yerleştirin.

Alıcı fareleri, onaylanmış bir hayvan protokolüne göre enjekte edilebilir bir anestezik ile uyuşturun. Bir pençe sıkarak farenin anestezi seviyesini kontrol edin. Tutam için bir reaksiyonun olmaması, cerrahi bir anestezi düzlemini gösterir.

Her farenin sol tarafını kalçadan omzuna kadar, sırtın merkezi ile mide arasında tıraş edin. Deri altında, hayvanın omzuna veya kasık üçgenine kilogram seyreltilmiş karprofen başına 6 miligram enjekte edin. Trokarın kanülünü 60 milimetrelik bir tabakta PBS ile yıkayın. Bir çift künt, kavisli forseps kullanarak, 60 milimetrelik çanaktan bir parça timus kanülün açıklığının hemen içine yerleştirin, ardından dokuyu kanüle aspire etmek için trokarı geri çekin.

Daha sonra, hücre peleti ile tüpe 5 mikrolitre soğuk jelatinimsi protein karışımı eklemek için pozitif yer değiştirmeli bir pipet ve soğutulmuş bir uç kullanın ve hücre süspansiyonunu oluşturmak için hafifçe karıştırın. Hücre süspansiyonunu kanülün açıklığına pipetleyin ve iğneyi yüklemek için trokarı yavaşça geri çekin.

Farenin traşlı bölgesini povidon-iyot ve ardından üç kez izopropanol ile temizleyin. Dalağın yerini gösteren derinin altındaki en koyu noktayı belirleyin. Böbrek, dalağın yaklaşık 5 milimetre dorsalidir.

Pençe çimdiklemesine bir reaksiyon olmaması ile uygun bir anestezi seviyesi sağlandıktan sonra, cildi kaldırmak için kavisli forseps kullanın ve dalağa paralel olarak ciltte 15 milimetrelik bir kesi yapmak için cerrahi makas kullanın. Ardından, aşağıdaki periton tabakasında benzer bir kesim yapın.

Erkeklerde, böbrek kolayca görülebilir, bu nedenle sadece karın üzerine bastırılarak ekstrüde edilir. Böbreği bir hemostat veya bir çift kavisli künt forseps ile destekleyin. Kadınlarda, yumurtalıklar böbreğin kolay çıkarılmasını engelleme eğilimindedir. Bir hemostat kullanarak, yumurtalığı alın ve böbreği dikkatlice açığa çıkarın.

Böbrek kapsülünün arka ucunda küçük bir delik açmak için iğne uçlu forseps kullanın. Kanülün açıklığı tamamen böbrek kapsülü tarafından kaplanana kadar trokarı bu deliğe ve böbrek boyunca kaydırın. Böbrek kapsülünün altındaki dokuyu nazikçe çıkarın ve trokarı geri çekin. Timus parçasının iğne ile çıkmadığından emin olmak için kavisli bir forseps kullanın.

Daha sonra, peritonu forseps ile yukarı kaldırın ve böbreği tekrar yerine itmek için hemostatı nazikçe kullanın. Peritonda cerrahi dikişle çift düğümlü bir dikiş atın. Ayrıca, cildi kapatmak için iki otomatik klips sarılmış klips yerleştirin.

Şimdi, transdüksiyon CD34 pozitif hücreleri karıştırın ve 100 mikrolitrelik bir hacimde 0.5 x^{10 6} hücreyi bir insülin şırıngasına aspire edin. Bu hücreleri retro-orbital ven enjeksiyonu yoluyla fareye enjekte edin.

Enjeksiyondan sonra, her göze küçük bir damla kayganlaştırıcı damlatın ve fareyi bir kafese yan yatırın. Tüm fareleri implante ettikten sonra, hayvanların barınma odasına geri göndermeden önce bilinçlerini geri kazandıklarını ve ayakta olduklarını onaylayın.