JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:20 dk. • July 8th, 2025
Kemik iliği kök hücre kültürü ile başlayın.
Hücreleri ayırmak ve hücre kümelerini kırmak için tek hücreli bir süspansiyon oluşturan tripsin-EDTA tamponunu tanıtın.
Santrifüj, ardından süpernatanı çıkarın. Peleti taze bir ortamla yeniden askıya alın.
Süspansiyonu bir şırıngaya aktarın ve bir membran filtre ünitesine bağlayın.
Pistonu itin ve süzüntü içeren ortamı atın.
Filtreyi çıkarın. Şırıngayı taze bir ortamla doldurun. Filtreyi tekrar bağlayın ve pistonu hızla itin.
Sıvının basıncı, hücreyi filtre gözeneklerine doğru zorlar.
Bu, küresel bir plazma zarı vezikülü veya PMV üretir.
Bu veziküller, zarla çevrili hücre bileşenleri ve organelleri içerir.
Yarı saydam küresel vezikülleri gözlemlemek için süzüntüyü ters çevrilmiş bir faz kontrast mikroskobu altında inceleyin.
Veziküllerin boyutları, filtre membranının gözenek boyutuyla eşleşir ve PMV'lerin oluşumunu doğrular.
PMV'leri oluşturmak için, önce, 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte nemlendirilmiş bir inkübatörde altı oyuklu bir plakanın bir oyuğunda tam DMEM kültür ortamında kültür faresi PMSC'leri. Hücreler% 90 birleşmeye ulaştığında, kuyuyu 0,5 mililitre kalsiyum içermeyen PBS ile durulayın ve hücreleri 0,5 mililitre% 0,
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin