JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:21 dk. • July 8th, 2025
Tümörle ilişkili nötrofiller veya TAN'lar içeren bir murin melanom tümörü alın.
TAN'lar, anjiyogenezi, tümörlerde kan damarlarının çoğalmasını uyaran ve tümör büyümesini kolaylaştıran nikotinamid fosforibosiltransferaz veya NAMPT enziminin yüksek aktivitesini gösterir.
Dokuyu kıyın ve doku matrisini bozmak için enzimler ekleyin, hücreleri gevşetin.
Süspansiyonu bir süzgeçten geçirin ve hücreleri peletlemek için santrifüjleyin.
Kırmızı kan hücrelerini parçalamak için bir lizasyon tamponu ekleyin, ardından süpernatan içeren hücre kalıntılarını santrifüjleyin ve atın.
Hücresel Fc reseptörlerini bloke etmek için antikorlar ekleyin, böylece spesifik olmayan immün boyamayı önleyin.
TAN'lardaki yüzey belirteçlerine özgü florofor etiketli bir antikor kokteyli ve ölü hücreleri ayırt etmek için bir boya ekleyin.
FACS kullanarak, florofor etiketli canlı TAN'ları izole edin ve bunları bir mikroplaka üzerine aktarın.
Seçilen kuyucuklara NAMPT aktivitesini bloke eden bir inhibitör ekleyin ve inkübe edin.
Anjiyogenez uyarıcı kapasitelerini değerlendirmek için hücreleri kullanın. İnhibitör ile tedavi edilen TAN'lar, tedavi edilmeyen TAN'lara kıyasla azalmış anjiyogenez gösterir.
Tümörle ilişkili n
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin