Mycobacterium bovis BCG Üzerinde Hedef Antijenlerin Sunulması İçin Bir Avidin-Biotin Konjugasyon Tekniği

Bakteri topaklanmasını önlemek için iyonik olmayan bir yüzey aktif madde ile muamele edilmiş bir Mycobacterium bovis BCG süspansiyonu ile başlayın.

Ardından, bir biyotinilasyon reaktifi ekleyin ve inkübe edin.

İşlevsel bir bağlayıcıya kompleks oluşturan bir biyotin kompleksi olan bu biyotinilasyon reaktifi, biyotin moleküllerinin bakteri yüzey proteinlerine bağlanmasını kolaylaştırarak bakterileri etiketler.

İnkübasyon sonrası, reaksiyona girmemiş biyotinilasyon reaktifini çıkarmak için biyotin etiketli bakteri süspansiyonunu santrifüjleyin.

Bakterileri bir tampon içinde yeniden süspanse edin. Monomerik avidin ile kaynaşmış bir hedef antijen alanı içeren rekombinant bir protein olan avidin-füzyon proteininin bir çözeltisini ekleyin.

İnkübasyon sırasında avidin, biotin'e bağlanarak hedef antijenlerle bakteriyel yüzey modifikasyonunu kolaylaştırır.

Bağlanmamış füzyon proteinlerini çıkarmak için süspansiyonu santrifüjleyin.

Antijen kaplı bakterileri iyonik olmayan bir yüzey aktif madde içeren bir tampon içinde yeniden süspanse edin. Bakteriler üzerindeki antijen kaplaması, bağışıklık tepkilerini tetikleme özelliğini artırabilir.

Kişisel koruyucu ekipman kullanarak bir biyogüvenlik kab