Dendritik Hücrelerin Yüksek Tuz Tedavisi ve Farelere Evlat Edinme Transferi için Bir Yöntem

JoVE Encyclopedia of Experiments

İmmünoloji

0 görüntüleme • 3:16 dk • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dendritik hücrelerin veya DC'lerin bir süspansiyonunu içeren çok kuyulu bir plaka ile başlayın.

Hipertansif bir durumu taklit etmek için, yüksek konsantrasyonda sodyum iyonları içeren bir kültür ortamı ekleyin ve inkübe edin.

İnkübasyon sırasında, sodyum iyonları hücreye girerek hücre içi sodyum konsantrasyonunu arttırır.

Bu, hücre içi sodyum iyonlarının hücre dışı kalsiyum iyonları ile değişimini tetikler.

Artan iç kalsiyum seviyeleri, hücresel proteinlere bağlanan reaktif aldehitlerin oluşumunu kolaylaştıran yolları aktive eder. Bu, bu modifiye proteinleri yüzeylerinde gösteren DC'leri aktive eder.

Kuluçka sonrası, hücreleri bir tüpte toplayın ve santrifüjleyin.

Süpernatanı çıkarın. Hücreleri yeniden askıya almak için yeni tampon ekleyin.

Hücre süspansiyonunu bir şırıngaya çekin.

Anestezi uygulanmış bir fareyi alın ve hücre süspansiyonunu göz yuvasının arkasındaki bir alan olan retroorbital olarak enjekte edin.

Aktive edilmiş bağışıklık hücrelerinin enjekte edilmesi işlemine evlat edinici hücre transferi denir.

900 mikrolitre DC süspansiyonunu 24 oyuklu düz düz tabanlı bir şahin plakasına pipetleyin. 190 milimolar nihai sodyum konsantrasyonu için her bir oyuğa 100 mikrolitre yüksek tuzlu DC kültür ortamı ekleyin. Plakayı etiketleyin ve 48 saat boyunca 37 santigrat derecede nemlendirilmiş bir karbondioksit inkübatörüne yerleştirin.

48 saat sonra, plakayı inkübatörden çıkarın. CD11c pozitif DC'leri yeniden süspanse etmek için hücre kültürü ortamını tek bir kuyucukta yukarı ve aşağı silin. Tüm süspansiyonu karşılık gelen etiketli 1.6 mililitrelik bir tüpe aktarın. Kaplanan her bir kuyucuk için bunu tekrarlayın.

Tüm tüpleri 300 kez g ve dört santigrat derecede 10 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı aspire edin ve DC peletini 100 mikrolitre steril DPBS ile yeniden süspanse edin. Daha sonra, DC çözeltisini tüplerden birinden 27 gauge yarım inçlik bir iğne ile donatılmış 1 mililitrelik bir şırıngaya çekin.

Stabil bir cerrahi düzlem elde etmek için saf erkek, 10 haftalık, C57 siyah altı fareyi %2 izofluran altına yerleştirin. Pedal refleksi eksikliği ile anestezi seviyesini kontrol edin. Stabil bir cerrahi düzlem elde edildikten sonra, iğneyi yaklaşık 30 derecelik bir açıyla retro-orbital boşluğa yavaşça ve dikkatlice sokun.

Yavaş ve yumuşak bir şekilde CD11c-pozitif DC süspansiyonunu enjekte edin. Enjeksiyon tamamlandıktan sonra, göze zarar vermemeye dikkat ederek retro-orbital boşluk için iğneyi dikkatlice çıkarın. Ardından, fareleri burun konisinden çıkarın ve anesteziden iyileşme sırasında yaklaşık 30 dakika izleyin.

08:22

Murine B-1a Hücrelerinde CXCR4'ün Retroviral Aşırı Ekspresyonu ve Hedeflenen B-1a Hücre Nakliiçin Kemik İliği ve IgM Üretimine Geçişinde Benimsenmiş Transfer

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:29

IL-33 ile Uyarılmış Makrofajların, İdiyopatik Pulmoner Fibroz Üzerindeki Etkilerini In Vivo Olarak İncelemek için Bleomisin Kaynaklı Fare Modellerine Evlat Edinilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:03

Farelerde Otoimmün Diyabetin Evlat Edinilen Transfer Modelinde Greft Sağkalımının Biyolüminesan İzlenmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:39

Myeloid dendritik hücreler kemik iliği öncüleri Kültür

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:57

Kemik İliği Kaynaklı Dendritik Hücreler Üretimi: Fare Kemik İliğinden Dendritik Hücreler Üretme Yöntemi

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:40

İmmünoterapi için Tümör Antijen-yüklü Olgun dendritik hücreler hazırlanması

İlgili videolar

0 Görüntüler

16:04

Bir Tetrasiklin düzenlenmiş Hücre Hattı Özellikle dendritik hücreler Hedef Yüksek titre Lentiviral vektörler üretir

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:09

Fare Dendritik Hücre Alt Grupları İzolasyonunda bir Verimli ve Yüksek Verim Yöntem

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:48

Yalıtım Protokolü fare monosit kaynaklı dendritik hücreler ve onların sonraki Vitro harekete geçirmek ile tümör bağışıklık kompleksleri

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:51

Geliştirme ve işlevsel fare Tolerogenic dendritik hücrelerin karakterizasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 22 Ağustos 2026