JoVE Encyclopedia of Experiments
İmmünoloji
0 görüntüleme • 2:19 dk • July 8th, 2025
Stereomikroskop altında anestezi uygulanmış bir fare ile başlayın, farenin kulaklarından birinin alt tarafı yapışkan bantla sahneye sabitlenir.
Gözler kurumasını önlemek için bir merhem ile kaplanır.
Bir sıtma paraziti olan Plasmodium'un sporozoit aşaması ile yüklü bir şırınga getirin. Canlı sporozoitler, bulaşıcı olmamaları için radyasyonla zayıflatılır.
Stereomikroskobu kullanarak, kulağın üst tarafına enjekte edin, en dıştaki epidermis tabakasına nüfuz edin ve sporozoitleri dermise bırakın.
Çıkarmadan önce enjekte edilen süspansiyonun geri akışını önlemek için iğneyi kısa bir süre yerinde tutun.
Enjeksiyon bölgesinde papül adı verilen gözle görülür bir şişlik, enjeksiyonun başarılı olduğunu doğrular.
Aynı kulağa birden fazla enjeksiyon yapın.
Enjekte edilen kulağı serbest bırakın ve enjeksiyonları diğer kulağa tekrarlayın.
Enjeksiyon sonrası, farenin iyileşmesine izin verin.
Enjekte edilen sporozoitler, bağışıklık sistemini parazite karşı hazırlayan bir bağışıklık tepkisini tetikler.
Sporozoitleri enjekte etmeden önce, deney hayvanının uygun sedasyon seviyesini ayak parmağı çimdikleme ile onaylayın ve kornea kurumasını önlemek için göz merhemi uygulayın. Daha sonra, hızlı bir şekilde çalışarak, kulak kepçesinin ventral tarafını bir stereomikroskop altında nazikçe sabitlemek için şeffaf bant kullanın ve 0.6 mikrolitre yeniden askıya alınmış parazit içeren 35 gauge bir iğne ile donatılmış 10 mikrolitrelik bir şırınga yükleyin.
Daha sonra, iğneyi, eğimli tarafı yukarı bakacak şekilde, kulağın dorsal tarafındaki epidermisin altına dikkatlice yerleştirin ve bölgeye 0.15 mikrolitre sporozoit enjekte edin. Enjeksiyon bölgesinde karakteristik bir papül gözlenecektir. Dermisi az önce gösterildiği gibi üç kez daha enjekte ettikten sonra, bandı dikkatlice çıkarın ve tamamen iyileşene kadar fareyi izleyin.
Bu makale, bağışıklık yanıtlarını incelemek amacıyla anestezi uygulanmış farelerin kulaklarına Plasmodium sporozoitlerinin enjekte edilmesi yöntemini tanımlamaktadır. Teknik, enfeksiyöz olmayan sporozoitlerin dermise başarılı bir şekilde iletilmesini sağlamak için hassas enjeksiyon gerektirir.
Bu yöntem, kontrollü bir murine modelde immün priming'i incelemek amacıyla atenüe antijenlerin hassas bir şekilde intradermal olarak iletilmesini sağlar. Sporozoit kaynaklı immün yanıtların değerlendirilmesi için tekrarlanabilir bir sistem sunarak, erken aşama aşı adayı değerlendirmelerini destekler. Bu yaklaşım, antijen iletimini ve konakçı etkileşim dinamiklerini açıklığa kavuşturarak sıtma aşısı geliştirmedeki mekanistik risk azaltma sürecine katkıda bulunur.
Bu teknik, ön madde optimizasyonu ve preklinik etkinlik testleri öncesinde antijen iletiminin ve immün aktivasyonun değerlendirildiği erken keşif iş akışlarına uygundur.
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
Son güncelleme: 22 Ağustos 2026