Bir Beyin Dilimindeki Dopaminerjik Nöronun Dendritinden Yama-Kelepçe Kayıtları

Yapay bir beyin omurilik sıvısına veya farklı iyonlar içeren aCSF'ye batırılmış hareketsiz hale getirilmiş bir beyin dilimi ile bir elektrofizyoloji kurulumuyla başlayın.

Kurulum, bir kayıt elektroduna ve bir amplifikatöre bağlı potasyum açısından zengin bir çözelti ile doldurulmuş bir yama pipeti içerir.

Tıkanmasını önlemek için pipete pozitif hava basıncı uygulayın. Ardından, bir dopaminerjik nöronun sinyal alan uzantısı olan bir dendritin yakınına yerleştirin.

Ortaya çıkan membran çukurlaşması, dendrite yakınlığı doğrular.

Pipet ile dendritik membran arasında sıkı bir sızdırmazlık oluşturarak emme oluşturmak için pozitif basıncı serbest bırakın.

İlk iyon hareketini temel voltajda bir aksiyon akımı olarak kaydedin.

İlgili kanalları bloke etmek ve iyonun bu kanallardan geçmesini önlemek için sodyum ve kalsiyum kanal blokerleri ile aCSF'yi içeri akıtın.

Voltaj kapılı bir katyon kanalı açmak için negatif bir voltaj uygulayın.

Bu kanal, potasyum iyonlarının nörona girmesine izin verir, aksiyon akımını arttırır ve dopaminerjik bir nöronda dendritin uyarılmasını önerir.

Bu prosedürde, bir beyin dilimini kayıt odasına aktarın. Dilimi kayıt odasının altına bir platin halka ile sabitleyin ve dilimin pürüzsüz, düz bir yüzeye sahip olduğundan emin olun. Daha sonra, aynı düzlemde uzun bir mesafe boyunca uzanan bir dendrite sahip bir nöron seçin ve ilgilenilen dendritin iyi tanımlanmış bir soma kadar takip edilebildiğinden emin olun. Ardından, yama pipetini elektrot çözeltisiyle doldurun.

Dendriti hücreye bağlı modda yamalamak için, dendritin bir kısmını tanımlayın ve odaklanın. Pipete pozitif basınç uygulayın ve mikromanipülatörü kullanarak indirin. Ardından, pipeti zarın yakınına yerleştirin ve küçük bir çukur oluşturmak için basıncı ayarlayın. Ardından, pipet ucundaki basıncı serbest bırakın ve pipet direncini kontrol ederken dendrite yama yapın. Hücreye bağlı kayıtlar için 1 giga ohm'dan daha büyük, en iyi ihtimalle 3 ila 10 giga ohm arasında bir sızdırmazlık direnci elde etmeye çalışın.

Daha sonra, dendritin deformasyonunu önlemek için pipeti zardan birkaç mikrometre geri çekin. Burada görülen aksiyon akımları, nigral nöronların spontan aksiyon potansiyellerini temsil eder. Aksiyon akımlarını bastırmak için ACSF'ye kalsiyum ve sodyum kanal blokerleri uygulayın. Ardından, hiperpolarizasyonla aktive olan katyon akımını uyandırmak için 90 milivoltluk bir tutma potansiyelinden negatif 0 milivoltluk bir voltaj adımı uygulayın.