JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:40 dk. • July 8th, 2025
Çok elektrotlu bir dizi veya MEA üzerinde spiral bir ganglion nöron kültürü ile başlayın.
MEA, bir devre aracılığıyla kontaklara bağlanan kayıt elektrotlarından oluşur.
Ortamı çıkarmak için MEA'yı yıkayın ve kayıt sırasında nemden kaynaklanan gürültüyü önlemek için temas noktalarını kurutun.
MEA'yı tutucusuna monte edin ve kayıt kurulumuna takın.
MEA kontakları, elektrik sinyallerini kayıt kurulumuna ileten tutucu konektörlerle hizalanır.
Nöronlarda normal fizyolojik aktiviteye izin veren hücre dışı ortamı taklit eden bir çözelti ekleyin.
Kayda başla. Elektrotlar, nöronlar tarafından üretilen ve yazılım arayüzünde ani artışlar olarak görselleştirilen spontan sinyalleri veya aksiyon potansiyellerini algılar.
Şimdi, spontan aktivite sergileyen bir elektroda bir elektrik darbesi uygulayın.
Nabız, komşu elektrotlardaki nöronları uyaran bir elektrik alanı oluşturur.
Stimülasyona bağlı aktiviteyi kaydedin.
Son olarak, voltaj kapılı iyon kanallarını bloke eden ve aksiyon potansiyeli oluşumunu önleyen bir nörotoksin ekleyin.
Arka plan gürültüsünü tanımlamak için sinyali kaydedin.
Toplu 18 günlük bir kültürden sonra, MEA kültürünü oda sıcaklığında daha önce hazırlanan hücre dışı çözelti ile yıkayın. Ardından, MEA çipinin temas noktalarını bir parça doku ile kurulayın ve MEA'ları MEA tutucusuna monte edin. Son olarak, MEA'yı kayıt kurulumuna yükleyin.
Daha sonra, hücre dışı çözeltiden 300 mikrolitre ekleyin ve kayıttan önce sistemin stabilize olması için 10 dakika bekleyin. Şimdi, tüm elektrotlardan iki dakika boyunca spontan aktiviteyi kaydedin ve aktif elektrotları tanımlayın. Ardından, stimülasyona yanıt veren elektrotları tanımlayın.
Stimülasyon artefaktını dışlamak için, aynı elektrottan 10 kez uyarın. Kültür 10 defadan en az sekizinde yanıt verirse, elektrot kaynaklı stimülasyon üzerine pozitif bir yanıt olarak kabul edilebilir. Arka plan gürültüsünü tanımlamak için, voltaj kapılı sodyum kanallarını bloke etmek için kültüre bir mikromolar konsantrasyonda TTX uygulayın ve ardından iki dakika boyunca kaydedin.