JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:57 dk. • July 8th, 2025
Kaplanmış lameller üzerinde kültürlenmiş zebra balığı retinal ganglion hücrelerini alın.
Bu hücreler, hidrojen peroksite duyarlı bir enzim olan Orp1'e kaynaşmış redoksa duyarlı yeşil floresan proteini roGFP2'yi üreten genetik olarak kodlanmış bir biyosensörü ifade eder.
Lameli ortamla birlikte canlı bir hücre görüntüleme odasına aktarın ve odayı ters çevrilmiş bir mikroskop üzerine yerleştirin.
Arka plan floresansını azaltmak için ortamı serumsuz ortamla değiştirin.
Düşük hidrojen peroksit seviyeleri nedeniyle, roGFP2 azaltılmış konformasyonunda kalır.
Biyosensörü 405 ve 480 nm dalga boylarında sırayla uyarın.
İndirgenmiş roGFP2, 480 nm'de bir uyarma zirvesi sergiler.
Hidrojen peroksit içeren bir ortama geçin.
Hidrojen peroksit hücrelere girer ve Orp1 ile reaksiyona girerek roGFP2'yi oksitler.
Biyosensörü tekrar heyecanlandırın.
Oksitlenmiş roGFP2, 405 nm'de bir floresan artışı ve 480 nm'de bir azalma sergiler.
Floresan yoğunluk oranını hesaplayın.
Orandaki bir artış, hücresel hidrojen peroksit seviyelerinin arttığını gösterir.
Görüntüleme gününde, RGC aksonlarının büyümesini doğrulamak için mikroskop altında hücreleri kontrol edin. Canlı hücre görüntüleme için, lamelleri kültür ka
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin